GSNOR抑制剂处理和GSNOR基因瞬时沉默对桃果实抗褐腐病的影响
发布时间：2021-07-14 16:38
桃果实收获于高温高湿季节,在采后很容易受病原菌侵染而发生腐烂,造成大量的损失,其中,由链核盘菌（Monilinia fracticola）引起的褐腐病是最严重的病害之一,低温虽然能抑制此病害的扩展,但是低温往往会带来严重的冷害问题。前期研究发现,一氧化氮（NO）可诱导桃果实提高抗病性,但其诱导抗病的机理还不清楚。近年来发现,蛋白亚硝基化作用是生物体完成NO信号传导的主要形式。亚硝基谷胱甘肽还原酶（GSNOR）通过对亚硝基谷胱甘肽（GSNO）的降解参与NO的信号转导,并通过调控亚硝基硫醇（SNOs）和蛋白质的亚硝基化作用参与植物的防卫反应。但是,目前GSNOR在桃果实抗病性中的作用尚不清楚。因此,在本研究中,以中华寿桃为实验材料,用GSNOR抑制剂（N6022）和NO对采后桃果实进行处理,探究它们对桃果实褐腐病的影响及作用机理。通过基因瞬时沉默GSNOR后进行亚硝基化修饰组学分析探究GSNOR在抗病过程中的分子机制。具体结果如下:（1）60μM N6022和15μM NO溶液处理显著降低了桃果实的发病率和病斑直径,提高了谷胱甘肽还原酶（GR）的活性和GR的基因表达,抑制了GSNOR的活性...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：91 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
在23℃贮藏期间GSNOR抑制剂（N6022）和NO处理对桃果实病害发展的影响
山东农业大学硕士学位论文273.1.2GSNOR抑制剂和NO对桃果实GR和GSNOR活性及基因表达的影响图2在23℃贮藏期间GSNOR抑制剂（N6022）和NO处理对桃果实GR（A）和GSNOR（B）活性以及GR（C）和GSNOR（D）基因表达的影响Fig.2EffectofGSNORinhibitor(N6022)andNOtreatmentontheactivityofGR(A)andGSNOR(B)andthegeneexpressionofGR(C)andGSNOR(D)inpeachfruitduringstorageat23°C桃果实接种褐腐菌后，GR活性呈下降趋势，与对照相比，NO和GSNOR抑制剂显著抑制了GR活性的下降（图2A）。GSNOR的活性在6h时显著升高，NO和GSNOR抑制剂均抑制了GSNOR的活性，并且GSNOR抑制剂的抑制作用比NO的抑制作用强（图2B）。通过测定结果发现GR和GSNOR的基因表达水平在0-12h时变化明显，在之后变化不显著，所以图中只显示了0-12h的基因表达情况。从图中可以看出，GR的基因表达水平总体呈现下降趋势，NO和GSNOR抑制剂处理的桃果实中GR的表达水平明显高于对照（图2C）。NO和GSNOR抑制剂处理的桃果实中GSNOR的基因表达水平在6h内显著低于对照，GSNOR抑制剂对GSNOR的表达具有最明显的抑制作用，但在12h时各处理组的GSNOR表达水平没有显著性差异（图2D）。
GSNOR抑制剂处理和GSNOR基因瞬时沉默对桃果实抗褐腐病的影响283.1.3NO处理后桃果实GSNOR的S-亚硝基化位点测定图3通过位点特异性蛋白质组学将GSNOR的Cys-85鉴定为S-亚硝基化残基（A）并在Uniprot中预测了桃GSNOR蛋白的3D结构模型（B）Fig.3Cys-85ofGSNORwasidentifiedasanS-nitrosylatedresiduebysite-specificproteomicmassspectrometry(A)and3DstructuremodelofGSNORproteinofpeachwaspredictedinUniprot(B)将经过NO处理后6h和12h的桃果实样品和对照的桃果实样品进行亚硝基化修饰iodo-TMT标记定量组学分析，发现GSNOR蛋白的第85位的半胱氨酸的巯基被鉴定为S-亚硝基化残基。亚硝基化的肽段序列为KILYTALCHTDAYTWGGKD（图3A）。通过UniProt预测了GSNOR的蛋白模型，图中放大结构即是第85位半胱氨酸的结构（图3B）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]陆地棉漆酶基因家族鉴定及在黄萎病菌胁迫下的表达分析[J]. 赵晶,李旭彤,梁学忠,王志城,崔静,陈斌,吴立强,王省芬,张桂寅,马峙英,张艳. 作物学报. 2019(12)
[2]玉米雄穗长的全基因组关联分析[J]. 潘顺祥,赵美爱,裴玉贺,郭新梅,宋希云. 华北农学报. 2017(05)
[3]植物抗病机制及信号转导的研究进展[J]. 丁丽娜,杨国兴. 生物技术通报. 2016(10)
[4]一氧化氮处理对甜瓜果实采后病害的控制及活性氧代谢的作用[J]. 敬媛媛,吴斌,李艳娇,杨彩虹,朱璇. 现代食品科技. 2016(12)
[5]植物抗病机制的研究进展[J]. 杨银,高志勇. 科教导刊(中旬刊). 2016(09)
[6]番茄漆酶基因LeLACmiR397的克隆与表达分析[J]. 赵先炎,庞明利,赵强,任怡然,郝玉金,由春香. 园艺学报. 2015(07)
[7]植物代谢产物在抗病反应中的功能研究进展[J]. 覃瀚仪,李魏,戴良英. 中国农学通报. 2015(18)
[8]蛋白质巯基亚硝基化分子机制及其疾病相关性[J]. 石婷,陈铭,陈雄平,汪汲涛,万锕俊,赵一雷. 化学进展. 2015(05)
[9]蛋白质翻译后修饰及其生物学功能研究进展[J]. 孙琪,张辉,马语曼,张鑫,唐子人,王雯. 中华老年心脑血管病杂志. 2014(09)
[10]植物抗病性信号转导的研究[J]. 张红军. 吉林农业. 2013(11)
博士论文
[1]中国桃褐腐病菌及其抗药性相关研究[D]. 胡勐郡.华中农业大学 2013
硕士论文
[1]烟草属亚硝基谷胱甘肽还原酶在调控细胞死亡中作用的研究[D]. 初丛.浙江师范大学 2015
[2]ATHK1对PEG诱导的拟南芥抗氧化系统的影响研究[D]. 刘慧.扬州大学 2012
本文编号：3284507
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：91 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
在23℃贮藏期间GSNOR抑制剂（N6022）和NO处理对桃果实病害发展的影响
山东农业大学硕士学位论文273.1.2GSNOR抑制剂和NO对桃果实GR和GSNOR活性及基因表达的影响图2在23℃贮藏期间GSNOR抑制剂（N6022）和NO处理对桃果实GR（A）和GSNOR（B）活性以及GR（C）和GSNOR（D）基因表达的影响Fig.2EffectofGSNORinhibitor(N6022)andNOtreatmentontheactivityofGR(A)andGSNOR(B)andthegeneexpressionofGR(C)andGSNOR(D)inpeachfruitduringstorageat23°C桃果实接种褐腐菌后，GR活性呈下降趋势，与对照相比，NO和GSNOR抑制剂显著抑制了GR活性的下降（图2A）。GSNOR的活性在6h时显著升高，NO和GSNOR抑制剂均抑制了GSNOR的活性，并且GSNOR抑制剂的抑制作用比NO的抑制作用强（图2B）。通过测定结果发现GR和GSNOR的基因表达水平在0-12h时变化明显，在之后变化不显著，所以图中只显示了0-12h的基因表达情况。从图中可以看出，GR的基因表达水平总体呈现下降趋势，NO和GSNOR抑制剂处理的桃果实中GR的表达水平明显高于对照（图2C）。NO和GSNOR抑制剂处理的桃果实中GSNOR的基因表达水平在6h内显著低于对照，GSNOR抑制剂对GSNOR的表达具有最明显的抑制作用，但在12h时各处理组的GSNOR表达水平没有显著性差异（图2D）。
GSNOR抑制剂处理和GSNOR基因瞬时沉默对桃果实抗褐腐病的影响283.1.3NO处理后桃果实GSNOR的S-亚硝基化位点测定图3通过位点特异性蛋白质组学将GSNOR的Cys-85鉴定为S-亚硝基化残基（A）并在Uniprot中预测了桃GSNOR蛋白的3D结构模型（B）Fig.3Cys-85ofGSNORwasidentifiedasanS-nitrosylatedresiduebysite-specificproteomicmassspectrometry(A)and3DstructuremodelofGSNORproteinofpeachwaspredictedinUniprot(B)将经过NO处理后6h和12h的桃果实样品和对照的桃果实样品进行亚硝基化修饰iodo-TMT标记定量组学分析，发现GSNOR蛋白的第85位的半胱氨酸的巯基被鉴定为S-亚硝基化残基。亚硝基化的肽段序列为KILYTALCHTDAYTWGGKD（图3A）。通过UniProt预测了GSNOR的蛋白模型，图中放大结构即是第85位半胱氨酸的结构（图3B）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]陆地棉漆酶基因家族鉴定及在黄萎病菌胁迫下的表达分析[J]. 赵晶,李旭彤,梁学忠,王志城,崔静,陈斌,吴立强,王省芬,张桂寅,马峙英,张艳. 作物学报. 2019(12)
[2]玉米雄穗长的全基因组关联分析[J]. 潘顺祥,赵美爱,裴玉贺,郭新梅,宋希云. 华北农学报. 2017(05)
[3]植物抗病机制及信号转导的研究进展[J]. 丁丽娜,杨国兴. 生物技术通报. 2016(10)
[4]一氧化氮处理对甜瓜果实采后病害的控制及活性氧代谢的作用[J]. 敬媛媛,吴斌,李艳娇,杨彩虹,朱璇. 现代食品科技. 2016(12)
[5]植物抗病机制的研究进展[J]. 杨银,高志勇. 科教导刊(中旬刊). 2016(09)
[6]番茄漆酶基因LeLACmiR397的克隆与表达分析[J]. 赵先炎,庞明利,赵强,任怡然,郝玉金,由春香. 园艺学报. 2015(07)
[7]植物代谢产物在抗病反应中的功能研究进展[J]. 覃瀚仪,李魏,戴良英. 中国农学通报. 2015(18)
[8]蛋白质巯基亚硝基化分子机制及其疾病相关性[J]. 石婷,陈铭,陈雄平,汪汲涛,万锕俊,赵一雷. 化学进展. 2015(05)
[9]蛋白质翻译后修饰及其生物学功能研究进展[J]. 孙琪,张辉,马语曼,张鑫,唐子人,王雯. 中华老年心脑血管病杂志. 2014(09)
[10]植物抗病性信号转导的研究[J]. 张红军. 吉林农业. 2013(11)
博士论文
[1]中国桃褐腐病菌及其抗药性相关研究[D]. 胡勐郡.华中农业大学 2013
硕士论文
[1]烟草属亚硝基谷胱甘肽还原酶在调控细胞死亡中作用的研究[D]. 初丛.浙江师范大学 2015
[2]ATHK1对PEG诱导的拟南芥抗氧化系统的影响研究[D]. 刘慧.扬州大学 2012
本文编号：3284507
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