Wolfram综合征家系WFS1突变筛查、功能验证及生物信息学分析
发布时间：2021-07-20 10:33
目的:Wolfram综合征以尿崩症、糖尿病、视神经萎缩和神经性耳聋为主要临床表现,是一种特殊类型糖尿病,编码wolframin蛋白的WFS1基因突变是其发病的主要原因。本研究对临床发现的一例Wolfram综合征患者WFS1基因进行突变筛查,并对该突变以及本课题组以往在Wolfram综合征家系中发现的WFS1基因突变（F417de1、Y534D）进行体外克隆及相关功能验证。为了对WFS1基因的功能有进一步的了解,我们对Wfs1基因敲除小鼠的肝脏组织RNA全基因表达谱芯片数据进行DEG分析。方法:提取先证者及其父母外周血基因组DNA进行测序分析,找到WFS1基因突变位点;在体外应用诱导定点突变的方法进行WFS1基因突变的体外克隆,构建携带突变WFS1基因的表达质粒;将质粒瞬时转染细胞系,应用蛋白免疫印迹及实时荧光定量PCR的方法检测突变WFS1基因表达产物的水平;利用蛋白酶体抑制剂以及溶酶体抑制剂分析突变WFS1基因蛋白产物表达量的改变是否与降解有关;通过细胞免疫荧光技术在瞬时转染突变WFS1基因的COS7细胞系中观察突变wolframin蛋白的亚细胞定位;通过双荧光素酶报告基因实验检测瞬...
【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
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【参考文献】：
期刊论文
[1]Wolfram综合征二例[J]. 李青,贾伟平,方启晨. 中华内科杂志. 2005(11)
[2]中国人Wolfram综合征WFS1基因的新突变[J]. 方启晨,贾伟平,张蓉,李青,胡承,邵新宇,柴华旗,陆惠娟,项坤三. 中华医学杂志. 2005(35)
本文编号：3292661
【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１健康对照、先证者母亲、先证者灰基因测序峰图（箭头所示为??突变位点）??Ｆｉｇｕｒｅ?１?Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＷＦＳ１?ｇｅｎｅ?ｏｆ?ａ?ｈｅａｌｔｈｙ?ｃｏｎｔｒｏｌ，?ｔｈｅ?ｐｒｏｂａｎｄ?ａｎｄ??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]Wolfram综合征二例[J]. 李青,贾伟平,方启晨. 中华内科杂志. 2005(11)
[2]中国人Wolfram综合征WFS1基因的新突变[J]. 方启晨,贾伟平,张蓉,李青,胡承,邵新宇,柴华旗,陆惠娟,项坤三. 中华医学杂志. 2005(35)
本文编号：3292661
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