铅胁迫下椭圆食粉螨SOD基因的克隆与表达研究
发布时间：2021-07-21 09:03
椭圆食粉螨Aleuroglyphus ovatus（Troupeau）隶属于蜱螨亚纲Aacari、粉螨科Acaridae,是一种世界性的储粮害螨,且危害人体健康。重金属污染日益严重,对生物的健康及生存繁殖产生了严重危害。椭圆食粉螨抗氧化基因超氧化物歧化酶SOD对于Pb2+胁迫的响应机制尚不明确。本文克隆了椭圆食粉螨三个SOD基因cDNA全长,并且研究了不同浓度Pb2+胁迫下各发育阶段椭圆食粉螨总SOD酶活及mRNA表达变化规律,主要结果如下:1、椭圆食粉螨SOD酶活在不同发育阶段及不同浓度Pb2+胁迫下的响应测定5个不同浓度（0、12.5、25、50和100mg/kg,其中0mg/kg为对照组）Pb2+胁迫下椭圆食粉螨卵、幼螨、第一若螨、第三若螨和成螨的总SOD酶活。研究发现,0-100 mg/kg Pb2+处理下,椭圆食粉螨体内SOD酶活随着发育历期,呈先升后降的趋势,卵期酶活最低,第一若螨最高。随着Pb2+浓度升高,各发育阶段椭圆食粉螨SOD酶活呈先升后降趋势,但均显著高于对照组,其中,在25 mg/kg Pb2+浓度下各螨态SOD酶活显著高于其他处理组。此后SOD酶活随浓度升高而...
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２．１不同浓度Ｐｂ２＋胁迫对不同发育阶段椭圆食粉蜗ＳＯＤ酶活（Ｕ／ｍｇｐｒｏｔ）的影响??Ｆｉｇｕｒｅ?２．１?Ａｃｔｉｖｉｔｙ?（Ｕ／ｍｇｐｒｏｔ）?ｏｆ?ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ?ｄｉｓｍｕｔａｓｅ?（ＳＯＤ）?ｅｎｚｙｍｅ?ｆｒｏｍ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ??ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ?ｓｔａｇｅｓ?ｏｆ?Ａ．?ｏｖａｔｕｓ?ｅｘｐｏｓｕｒｅ?ｔ?
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【参考文献】：
期刊论文
[1]重金属铅对椭圆食粉螨形态及SOD、GST活性的影响[J]. 朱佩佩,汪丁,莫维芬,夏斌,邹志文. 应用昆虫学报. 2019(04)
[2]汞胁迫对红裸须摇蚊幼虫抗氧化酶活性的影响[J]. 耿飞飞,于洪贤,刘曼红,孟瑶. 东北林业大学学报. 2018(04)
[3]铅胁迫对舞毒蛾幼虫发育及解毒酶活性的影响[J]. 杨丽娜,王月月,孟昭军,严善春. 东北林业大学学报. 2018(03)
[4]半胱氨酸参与生物体重金属抗性的研究进展[J]. 张礼,孙堆,王晓,郑春丽. 生物技术通报. 2017(05)
[5]超氧化物歧化酶的研究进展[J]. 袁牧,王昌留,王一斐,徐贵华,韩潇. 中国组织化学与细胞化学杂志. 2016(06)
[6]云南切梢小蠹超氧化物歧化酶基因的克隆与序列分析[J]. 赵琰明,朱家颖,泽桑梓,赵宁,杨斌. 植物保护. 2015(05)
[7]椭圆食粉螨主要发育期的形态学观察[J]. 郝瑞峰,张承伯,俞黎黎,李启松,杨李,滕飞翔,崔玉宝. 中国病原生物学杂志. 2015(07)
[8]重金属对昆虫抗氧化酶影响研究进展[J]. 吴启仙,夏嫱. 环境昆虫学报. 2014(02)
[9]镉胁迫对家蚕脂肪体脂质过氧化物含量及抗氧化酶活性和mRNA表达的影响[J]. 袁红霞,褚峰,秦粉菊,刘佳,何亚清,刘航. 昆虫学报. 2014(02)
[10]甜菜夜蛾不同龄期幼虫对药剂的敏感性及其与酶活力的关系[J]. 王泽华,石宝才,康总江,朱亮,金桂华,魏书军,宫亚军. 应用昆虫学报. 2014(01)
博士论文
[1]中华稻蝗对重金属镉的解毒机制研究[D]. 张育平.山西大学 2012
硕士论文
[1]椭圆食粉螨卵黄原蛋白基因对重金属铅胁迫的响应机制[D]. 奚剑飞.南昌大学 2019
[2]朱砂叶螨超氧化物歧化酶基因的克隆与表达分析[D]. 李晓月.南昌大学 2018
[3]重金属铅胁迫下椭圆食粉螨实验种群生态学研究[D]. 闵强.南昌大学 2017
[4]椭圆食粉螨Hsp70基因的克隆及其在热胁迫下的表达研究[D]. 李雷.南昌大学 2016
[5]汞和镉对紫贻贝（Mytilus edulis）的单一与联合作用效应[D]. 潘京津.中国海洋大学 2015
本文编号：3294731
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２．１不同浓度Ｐｂ２＋胁迫对不同发育阶段椭圆食粉蜗ＳＯＤ酶活（Ｕ／ｍｇｐｒｏｔ）的影响??Ｆｉｇｕｒｅ?２．１?Ａｃｔｉｖｉｔｙ?（Ｕ／ｍｇｐｒｏｔ）?ｏｆ?ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ?ｄｉｓｍｕｔａｓｅ?（ＳＯＤ）?ｅｎｚｙｍｅ?ｆｒｏｍ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ??ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ?ｓｔａｇｅｓ?ｏｆ?Ａ．?ｏｖａｔｕｓ?ｅｘｐｏｓｕｒｅ?ｔ?
?第３章椭圆食粉螨超氧化物歧化酶基因的克隆及分析???３．２结果与分析??３．２．１椭圆食粉螨基因全长的克隆??３．２．１．１椭圆食粉蟥总ＲＮＡ提取质？??将提取得到的椭圆食粉螨总ＲＮＡ立即用１％琼脂糖凝胶进行电泳检测，结??果如图３．１所示，有三条亮带，其中２８Ｓ和１８Ｓ明亮且单一，还有一条较浅的??５．８?Ｓ，表明提取的椭圆食粉螨总ＲＮＡ质量较好，较为完整。测得椭圆食粉螨总??ＲＮＡＡ２６〇／Ａ２８ｑ值的范围为１．９８＜Ａ２６ｇ／Ａ２８〇＜２．１，表明所抽提椭圆食粉螨ＲＮＡ纯度??较好。??图３．１椭圆食粉螨总ＲＮＡ琼脂糖凝胶电泳图??Ｆｉｇｕｒｅ?３．１?Ｔｈｅ?ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｆｏｒ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｏｆ?Ａ．?ｏｖａｔｕｓ??３．２．１．２也ｃＤＮＡ序列的全长克隆??以椭圆食粉螨５’／３’ＲＡＣＥ?ｃＤＮＡ为模板，根据椭圆食粉螨转录组测序所获??的三个ＳＯＤ核苷酸序列片段设计特异性引物，ＰＣＲ扩增（为巢式ＰＣＲ），电泳??检测，出现单一明亮目的条带后割胶纯化，连接转化并筛选阳性克隆进行测序，??分别获得的５’末端和３’末端，长度均小于３００ｂｐ，??如图３．２为电泳结果。查看测序结果峰图，并比对核苷酸序列，翻译无误确认扩??增产物为目的基因后，将三个ＳＯＤ?ｃＤＮＡ末端核苷酸序列分别与对应的中间序??列进行拼接所得即为椭圆食粉螨三个ＳＯＤ基因ｃＤＮＡ全长序列。??２１??
?第３章椭圆食粉螨超氧化物歧化酶基因的克隆及分析???图３．２．椭圆食粉螨Ａ？Ｓ０Ｄ７，?ｄｃ＾ＯＤ３的５’ＲＡＣＥ和３’ＲＡＣＥ?ＰＣＲ产物电泳图??（左边为５’ＲＡＣＥＰＣＲ产物电泳图，右边为３’，ｌＯＯＯｂｐ?Ｍａｒｋｅｒ）??Ｆｉｇｕｒｅ?３．２．?Ｔｈｅ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｆｏｒ?５！ＲＡＣＥ?ａｎｄ?３＊ＲＡＣＥ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＡｏＳＯＤｌ，ＡｏＳＯＤ２，?ａｎｄ??ＡｏＳＯＤ３?ｉｎ?Ａｌｅｕｒｏｇｌｙｐｈｕｓ?ｏｖａｔｕｓ?（Ｔｈｅ?ｌｅｆｔ?ｉｓ?ｆｏｒ?５５?ＲＡＣＥ?ＰＣＲ，?ａｎｄ?ｔｈｅ?ｒｉｇｈｔ?ｉｓ?３９?ＲＡＣＥ，?ｗｉｔｈ??ｌＯＯＯｂｐ?Ｍａｒｋｅｒ．）??３．２．２椭圆食粉螨如义泌基因全长的生物信息学分析??３．２．２．１?ｃＤＮＡ序列全长特征??基因ｃＤＮＡ序列全长为ｌｌＯＯｂｐ，?ＯＲＦ为５４６ｂｐ，编码１８１个ａａ，??５’?ＵＴＲ为２９１?ｂｐ，?３’?ＵＴＲ为２６３?ｂｐ。推导如切以蛋白质分子式为??Ｃ８２３Ｈ１３２２Ｎ２５４Ｏ２５２Ｓ６，分子质量约为?１８．９９９ｋＤａ，理论等电点?ｐｉ?为?９．１０。??ＭＯＤ７氨基酸系列包含两个签名基序：１６５－１７６（ＧＮＡＧＧＲＶＧＣＧＩＩ），７卜??８１（ＧＦＨＩＨＱＹＧＤＴＲ）。Ｃｕ２＋结合位点为?Ｈｉｓ７３，Ｈｉｓ７５，Ｈｉｓ％，Ｈｉｓｌ４７。Ｚｎ２＋结合??位点?Ｈｉｓ９０，Ｈｉｓ９８，?Ｈｉｓｌ０７，ＡｓｐｌｌＯ?（见图?３．３）。??３．２．２．２?ｃＤＮＡ序列全长特征??ＪｏＳＯＤ２基因ｃＤＮＡ序列全长为１０４２ｂｐ，ＯＲＦ为６９３ｂｐ，编码２３０个ａａ，??５，ＵＴＲ为
【参考文献】：
期刊论文
[1]重金属铅对椭圆食粉螨形态及SOD、GST活性的影响[J]. 朱佩佩,汪丁,莫维芬,夏斌,邹志文. 应用昆虫学报. 2019(04)
[2]汞胁迫对红裸须摇蚊幼虫抗氧化酶活性的影响[J]. 耿飞飞,于洪贤,刘曼红,孟瑶. 东北林业大学学报. 2018(04)
[3]铅胁迫对舞毒蛾幼虫发育及解毒酶活性的影响[J]. 杨丽娜,王月月,孟昭军,严善春. 东北林业大学学报. 2018(03)
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[5]超氧化物歧化酶的研究进展[J]. 袁牧,王昌留,王一斐,徐贵华,韩潇. 中国组织化学与细胞化学杂志. 2016(06)
[6]云南切梢小蠹超氧化物歧化酶基因的克隆与序列分析[J]. 赵琰明,朱家颖,泽桑梓,赵宁,杨斌. 植物保护. 2015(05)
[7]椭圆食粉螨主要发育期的形态学观察[J]. 郝瑞峰,张承伯,俞黎黎,李启松,杨李,滕飞翔,崔玉宝. 中国病原生物学杂志. 2015(07)
[8]重金属对昆虫抗氧化酶影响研究进展[J]. 吴启仙,夏嫱. 环境昆虫学报. 2014(02)
[9]镉胁迫对家蚕脂肪体脂质过氧化物含量及抗氧化酶活性和mRNA表达的影响[J]. 袁红霞,褚峰,秦粉菊,刘佳,何亚清,刘航. 昆虫学报. 2014(02)
[10]甜菜夜蛾不同龄期幼虫对药剂的敏感性及其与酶活力的关系[J]. 王泽华,石宝才,康总江,朱亮,金桂华,魏书军,宫亚军. 应用昆虫学报. 2014(01)
博士论文
[1]中华稻蝗对重金属镉的解毒机制研究[D]. 张育平.山西大学 2012
硕士论文
[1]椭圆食粉螨卵黄原蛋白基因对重金属铅胁迫的响应机制[D]. 奚剑飞.南昌大学 2019
[2]朱砂叶螨超氧化物歧化酶基因的克隆与表达分析[D]. 李晓月.南昌大学 2018
[3]重金属铅胁迫下椭圆食粉螨实验种群生态学研究[D]. 闵强.南昌大学 2017
[4]椭圆食粉螨Hsp70基因的克隆及其在热胁迫下的表达研究[D]. 李雷.南昌大学 2016
[5]汞和镉对紫贻贝（Mytilus edulis）的单一与联合作用效应[D]. 潘京津.中国海洋大学 2015
本文编号：3294731
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