mmp9基因敲除斑马鱼模型建立及其在铝致痴呆模型中的作用研究
发布时间：2021-07-22 06:51
阿尔茨海默病（Alzheimerdisease,AD）是以学习记忆障碍为主要特征并且与年龄相关的神经退行性疾病。随着全球老龄化现象的加重,阿尔茨海默病的患病人数在不断增加,造成的社会问题和经济负担日益严重,遗憾的是,AD的具体发病机制仍不清楚,因此,进一步的实验探讨和新的靶点筛选将是目前的研究方向。本实验通过铝中毒模型,确证差异表达的基因mmp9,并且利用Crispr/Cas9技术建立了 mmp9的基因敲除斑马鱼模型,联合APPsw斑马鱼痴呆模型及铝中毒,探讨mmp9基因在AD发生中的作用,为阿尔茨海默病的治疗提供新的靶点。具体研究内容和结果如下:1、mmp9基因上调在铝中毒斑马鱼模型中的验证实验室前期斑马鱼铝中毒模型的基因芯片结果显示,mmp9 mRNA转录水平升高,本实验利用野生型斑马鱼经100μg/L、pH==5.8的酸性AlC13处理40天,RT-qPCR验证脑内mmp9 mRNA转录水平上调（p<0.05）。2、mmp9基因敲除模型的建立利用CHOPCHOP网站,筛选敲除靶位点。构建pT7-mmp9-gRNA体外转录模板并进行体外转录。将体外转录的特异性gRNA（终浓度...
【文章来源】：安徽农业大学安徽省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２显微注射示意图??Ｆｉｇ．?２?Ｍｉｃｒｏｉｎｊｅｃｔｉｏｎ?ｓｃｈｅｍａｔｉｃ??（二）酶切及Ｓａｎｇｅｒ测序??
应结束后，进行编号并禁止喂食。实验开始时，用挡??板挡住长臂口，将斑马鱼放入起始区，２?ｍｉｎ后，抽开挡板，利用行为学记录系统，??追踪并记录斑马鱼找到ＥＣ区的时间。观察时间为６?ｍｉｎ，?６?ｍｉｎ内成功进入ＥＣ区的??斑马鱼，在ＥＣ区投喂食物进行奖励，６?ｍｉｎ内未进入ＥＣ的斑马鱼引导其进入ＥＣ区，??停留３?ｍｉｎ并给予食物。每天上午９点开始，连续测试４天。??．翻??Ｉ—：厂ｒ碰１??？?ＥＣ区??ｒ￣＂?？＇￣３??ｓｔａｒｔ??Ｌ：：：?一』??图３?：?“Ｔ”迷宫结构图??Ｉ－ｉｇ．?３?Ｉ?ｈｃ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?Ｔ?ｍａｚｅ??１．２．３．３病理学检测??（一）斑马鱼脑组织提取制片??每个模型组选取３条斑马鱼，冰上麻醉，在体式显微镜下取出完整脑组织，用４％??的多聚甲醛固定２４?ｈ，送公司制作石蜡切片。切片厚度为６?ｐｍ，将切片粘在防脱片??的载玻片上，６０°Ｃ烤片６?ｈ，得到数张白片用于后续试验。??２１??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]铝对斑马鱼幼鱼运动行为的影响及其机制[J]. 谈勇,许梦川,王远,张芳,李小满,陈豪,赵宝全,汪雪雁. 中国药理学与毒理学杂志. 2018(03)
[2]22种山茶科植物叶片铝含量及其亚细胞分布[J]. 渠心静,陈雪燕,戴生玉,袁军. 分子植物育种. 2018(03)
[3]深圳市2015年市售茶叶中金属污染现况及健康风险评估[J]. 杨淋清,王舟,潘柳波,张慧敏,罗贤如,李思果,张锦周,黄薇. 中国热带医学. 2017(12)
[4]2013-2016年济南市膳食食品中铝残留量监测及人群暴露评估[J]. 焦海涛,张鑫,杨晓倩,孙延斌,曹小丽,刘仲,刘素华. 现代预防医学. 2017(16)
[5]阿尔茨海默病的发病机制及治疗药物研究进展[J]. 应侠,吴振,雷严,王立强. 中国药房. 2014(33)
[6]胰岛素抵抗与胰岛素信号通路的相关关系研究进展[J]. 王廷伟,陈秋. 西南军医. 2014(01)
[7]铝电解工业PM2.5超细粉尘的控制技术研究[J]. 吕维宁,邓翔. 中国环保产业. 2013(09)
[8]以斑马鱼为模式动物研究生物分子对血脑屏障的通透性[J]. 付爱玲,陈亨宇,徐兴然,赵宝全. 药学学报. 2012(11)
[9]Gelatin degradation assay reveals MMP-9 inhibitors and function of O-glycosylated domain[J]. Jennifer Vandooren,Nathalie Geurts,Erik Martens,Philippe E Van den Steen,Steven De Jonghe,Piet Herdewijn,Ghislain Opdenakker. World Journal of Biological Chemistry. 2011(01)
[10]铝在阿尔茨海默氏病和帕金森氏病及透析病发病中的毒性及减轻铝负荷的药物研究进展[J]. 章福平,毕树平. 无机化学学报. 2000(03)
博士论文
[1]基于APP阿尔茨海默病转基因模型的脑微血管和神经元病变相关性研究[D]. 蒲韵竹.中国人民解放军军事医学科学院 2017
硕士论文
[1]斑马鱼UCP2基因敲除模型的建立及铝毒性的初步研究[D]. 谈勇.安徽农业大学 2018
[2]斑马鱼脑组织结构特性研究[D]. 陈微.南京农业大学 2015
[3]铝对斑马鱼学习记忆能力的影响及其相关机制初步研究[D]. 李春杰.西南大学 2014
[4]斑马鱼阿尔茨海默病动物模型的建立[D]. 蒲韵竹.西南大学 2013
本文编号：3296669
【文章来源】：安徽农业大学安徽省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２显微注射示意图??Ｆｉｇ．?２?Ｍｉｃｒｏｉｎｊｅｃｔｉｏｎ?ｓｃｈｅｍａｔｉｃ??（二）酶切及Ｓａｎｇｅｒ测序??
应结束后，进行编号并禁止喂食。实验开始时，用挡??板挡住长臂口，将斑马鱼放入起始区，２?ｍｉｎ后，抽开挡板，利用行为学记录系统，??追踪并记录斑马鱼找到ＥＣ区的时间。观察时间为６?ｍｉｎ，?６?ｍｉｎ内成功进入ＥＣ区的??斑马鱼，在ＥＣ区投喂食物进行奖励，６?ｍｉｎ内未进入ＥＣ的斑马鱼引导其进入ＥＣ区，??停留３?ｍｉｎ并给予食物。每天上午９点开始，连续测试４天。??．翻??Ｉ—：厂ｒ碰１??？?ＥＣ区??ｒ￣＂?？＇￣３??ｓｔａｒｔ??Ｌ：：：?一』??图３?：?“Ｔ”迷宫结构图??Ｉ－ｉｇ．?３?Ｉ?ｈｃ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?Ｔ?ｍａｚｅ??１．２．３．３病理学检测??（一）斑马鱼脑组织提取制片??每个模型组选取３条斑马鱼，冰上麻醉，在体式显微镜下取出完整脑组织，用４％??的多聚甲醛固定２４?ｈ，送公司制作石蜡切片。切片厚度为６?ｐｍ，将切片粘在防脱片??的载玻片上，６０°Ｃ烤片６?ｈ，得到数张白片用于后续试验。??２１??
ＡｂＤ?Ｍ?１?Ｂ??Ｂ；?Ｍ?ｍｌ?ｍ２?ｍ３?ｍ４??辦‘．‘：??图?５?ｐＴ７－ｇＲＮＡ?质粒酶切（Ａ）?ｍｌ－ｎｉ４ｇＲＮＡ?（Ｂ）电泳图??Ｆｉｇ．５?Ｔｈｅ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｌｉｏｒｅｓｉｓ?ｍａｐ?ｏｆｌｉｎａｒ?ｐＴ７－ｇＲＮＡ?（Ａ）?ａｎｄｍｌ－ｍ４ｇＲＮＡ?（Ｂ）??Ｍ：ＤＮＡＭａｒｋｅｒ，１：?ｐＴ７－ｇＲＮＡ?质粒酿丨刀产物，转录后?ｐＴ７－／？ｗ；？９－ｇＲＮＡ??Ｍ：?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ，?１－２：?Ｔｈｅ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ｐＴ７－；ｗｍ／？９－ｇＲＮＡ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ??２．２＿３?Ｃａｓ９?ｍＲＮＡ的制备结果??利用核酸内切酶Ｎｏｔ?Ｉ酶切ｐＣＳ２－ｎＣａｓ９ｎ质粒，获得线性化ｐＣＳ２－ｎＣａｓ９ｎ，见图??６Ａ，利用ｍＭＥＳＳＡＧＥｍＭＡＣＨＩＮＥ？ＳＰ６试剂盒进行体外转录，转录结果如图６Ｂ。??条带大小正确，Ｃａｓ９?ｍＲＮＡ制备成功。??ｍｍ??图６?ｐＣＳ２－ｎＣａｓ９ｎ质粒酶切（Ａ）和Ｃａｓ９?ｉｎＲＮＡ转录电泳图??Ｆｉｇ．?６?Ｔｈｅ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｍａｐ?ｏｆｌｉｎａｒ?ｐＣＳ２－ｎＣａｓ９ｎ?（Ａ）?ａｎｄ?Ｃａｓ９?ｍＲＮＡ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ??Ｍ：?ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ?５０００，线性化?ｐＣＳ２－ｎＣａｓ９ｎ?质粒，２：?Ｃａｓ９?ｍＲＮＡ??Ｍ：?ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ?５０００，?１：?Ｌｉｎａｒ?ｏｆ?ｐＣＳ２－ｎＣａｓ９ｎ?ｐｌａｓｍｉｄ，?２：?Ｃａｓ９?ｍＲＮＡ??２７??
【参考文献】：
期刊论文
[1]铝对斑马鱼幼鱼运动行为的影响及其机制[J]. 谈勇,许梦川,王远,张芳,李小满,陈豪,赵宝全,汪雪雁. 中国药理学与毒理学杂志. 2018(03)
[2]22种山茶科植物叶片铝含量及其亚细胞分布[J]. 渠心静,陈雪燕,戴生玉,袁军. 分子植物育种. 2018(03)
[3]深圳市2015年市售茶叶中金属污染现况及健康风险评估[J]. 杨淋清,王舟,潘柳波,张慧敏,罗贤如,李思果,张锦周,黄薇. 中国热带医学. 2017(12)
[4]2013-2016年济南市膳食食品中铝残留量监测及人群暴露评估[J]. 焦海涛,张鑫,杨晓倩,孙延斌,曹小丽,刘仲,刘素华. 现代预防医学. 2017(16)
[5]阿尔茨海默病的发病机制及治疗药物研究进展[J]. 应侠,吴振,雷严,王立强. 中国药房. 2014(33)
[6]胰岛素抵抗与胰岛素信号通路的相关关系研究进展[J]. 王廷伟,陈秋. 西南军医. 2014(01)
[7]铝电解工业PM2.5超细粉尘的控制技术研究[J]. 吕维宁,邓翔. 中国环保产业. 2013(09)
[8]以斑马鱼为模式动物研究生物分子对血脑屏障的通透性[J]. 付爱玲,陈亨宇,徐兴然,赵宝全. 药学学报. 2012(11)
[9]Gelatin degradation assay reveals MMP-9 inhibitors and function of O-glycosylated domain[J]. Jennifer Vandooren,Nathalie Geurts,Erik Martens,Philippe E Van den Steen,Steven De Jonghe,Piet Herdewijn,Ghislain Opdenakker. World Journal of Biological Chemistry. 2011(01)
[10]铝在阿尔茨海默氏病和帕金森氏病及透析病发病中的毒性及减轻铝负荷的药物研究进展[J]. 章福平,毕树平. 无机化学学报. 2000(03)
博士论文
[1]基于APP阿尔茨海默病转基因模型的脑微血管和神经元病变相关性研究[D]. 蒲韵竹.中国人民解放军军事医学科学院 2017
硕士论文
[1]斑马鱼UCP2基因敲除模型的建立及铝毒性的初步研究[D]. 谈勇.安徽农业大学 2018
[2]斑马鱼脑组织结构特性研究[D]. 陈微.南京农业大学 2015
[3]铝对斑马鱼学习记忆能力的影响及其相关机制初步研究[D]. 李春杰.西南大学 2014
[4]斑马鱼阿尔茨海默病动物模型的建立[D]. 蒲韵竹.西南大学 2013
本文编号：3296669
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