应用CRISPR/Cas9靶向细胞内整合的HPV、基因治疗宫颈癌

发布时间：2021-07-24 11:58

　　目的 通过突变整合于宿主细胞中的人乳头瘤病毒（human papillomavirus, HPV）16型的E6、E7致癌基因,探索预防和治疗宫颈癌的新方法。方法 以SiHa细胞系为研究对象,设计靶向其内整合的HPV16E6和E7基因的小引导RNA（small guide RNA,sgRNA）,将其克隆入CRISPR/Cas9质粒,并应用其将E6、E7基因敲除,随后应用错位酶切法和克隆测序检测突变效果,并用细胞迁移与侵袭实验检测细胞的侵袭力。结果 设计的sgRNA被克隆入CRISPR/Cas9质粒,经测序克隆正确。该质粒转染SiHa细胞后,可以引发靶点DNA的突变,致使E6和E7基因密码子改变,无法正确表达。E6、E7突变后SiHa细胞侵袭及增殖能力下降（t检验,pCas9组与psgE6-1-1-Cas9组相比,P＝0.0006; pCas9组与psgE7-1-2-Cas9组相比,P＝0.0007）,促进肿瘤抑制因子P53的表达恢复,细胞的恶性度降低。 

【文章来源】：国际遗传学杂志. 2020,(02)

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本文编号：3300610