黑曲霉中α-L-鼠李糖苷酶基因的调

发布时间：2021-07-27 18:10

　　α-L-鼠李糖苷酶（EC 3.2.1.40）是一种糖苷水解酶,它能够特异性水解非还原性末端的鼠李糖基。目前α-L-鼠李糖苷酶广泛地应用于食品、制药、化工等行业,市场前景广阔。微生物来源的α-L-鼠李糖苷酶一般都需要诱导物的诱导来促进产酶,但同时还伴随有β-葡萄糖苷酶产生,混合酶不仅存在纯化困难的问题还对后续应用造成不便。因此,得到单一并且催化效率高的α-L-鼠李糖苷酶就显得十分必要。本课题组前期分离得到一株黑曲霉菌株NCU-317,在进行诱导产α-L-鼠李糖苷酶的同时也有β-葡萄糖苷酶的产生。因此本研究拟通过现代分子生物学技术构建工程菌的方法来解决上述存在的问题。本论文主要结果如下:1、通过改变文献广泛报道的液体摇瓶为固体平板培养方法,提取到了完整的总RNA,随后采用改进的RACE技术并结合设计了特异性的接头引物,并充分运用了TdT末端转移酶的性质,还运用了Nested PCR、Touch-down PCR来提高RACE技术的稳定性和可靠性。经过实验发现此改良后的RACE法应用于黑曲霉中α-L-鼠李糖苷酶基因调取效果良好。2、以前期得到的黑曲霉NCU-317 cDNA为模板,通过普通P... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：100 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

翻转型和保持型糖苷酶作用机理图

1.2 α-L-鼠李糖苷酶常见水解底物结构；A：柚皮苷；B：槲皮苷；C：新橙皮苷；D丁；E：枸橘苷；F：橘皮苷；G：燕麦皂苷 AFig 1.2 Structures of seven substrates hydrolyzed by α-L-rhamnosidase. A: naringin, B:hesperidin, C: neohesperidin, D: rutin, E: poncirin, F: quercitrin, G: avenacoside A.

表达载体图示

【参考文献】：
期刊论文
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[2]塔宾曲霉固态发酵产物中α-L-鼠李糖苷酶的分离纯化及酶学性质分析[J]. 高庭,李利君,王耸,吴喆瑜,张文静,倪辉.  食品工业科技. 2016(15)
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[7]芦丁-α-鼠李糖苷酶分离提纯及其酶性质[J]. 王侃,鱼红闪,金凤燮.  大连轻工业学院学报. 2004(01)
[8]人参皂甙-α-鼠李糖苷酶分离提纯及其酶性质[J]. 金赞敏,鱼红闪,金凤燮.  大连轻工业学院学报. 2003(02)

硕士论文
[1]α-L-鼠李糖苷酶生产菌株的筛选及其应用[D]. 邬子彬.南昌大学 2018
[2]黑曲霉JMU-TS528菌株的α-L-鼠李糖苷酶基因的克隆和表达分析[D]. 张霞.集美大学 2014
[3]肠球菌中α-L-鼠李糖苷酶的分离纯化及酶学性质研究[D]. 王艳君.山东轻工业学院 2011



本文编号：3306290