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水温对大鲵幼体生长和性腺分化的影响及Wnt4基因的表达分析

发布时间:2021-07-28 01:53
  两栖动物的性腺分化是当今发育生物学的研究热点。两栖动物属于变温动物,其生长和性腺分化均受到环境温度的影响,研究温度对两栖动物的生长和性腺分化的影响,对于两栖动物保护具有重要的理论价值。本文在大鲵(Andrias davidianus)幼体适宜生长的水温范围内,设置了 14℃、21℃、24℃等3个水温梯度,分3次测量每个水温梯度下大鲵幼体的体重,采用石蜡切片、HE染色技术对其进行性别鉴定,旨在探究水温对大鲵幼体生长与性腺分化的影响。在性别鉴定的同时,依据本实验室高通量转录组测序数据筛选出的差异表达基因,选取了与性别分化相关的基因Wnt4,采用原位杂交技术对Wnt4在大鲵幼体精巢和卵巢中的表达进行了定位,还运用实时定量PCR技术、Western Bolt技术对Wnt4 的表达进行了定量,以此来探究Wnt4在大鲵幼体精巢和卵巢中的表达差异及水温变化对Wnt4表达量的影响。主要结果与结论如下:1.水温对大鲵幼体生长的影响。大鲵幼体在14℃水温下生长最慢,24℃次之,21℃最快;在3个水温梯度条件下,大鲵幼体生长速度差异显著(P<0.05)。表明在14℃~2 1℃水温范围内,大鲵幼体的生长... 

【文章来源】:陕西师范大学陕西省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】:75 页

【学位级别】:硕士

【部分图文】:

水温对大鲵幼体生长和性腺分化的影响及Wnt4基因的表达分析


图3-1荧光实吋定量程序图??Fig.3-1?Protocol?for?real-time?PCR??

序列,基因克隆,菌落


-53?134/142(94?/〇)?1/142(0%)?Plus/Plus??Query?5?GCTGG-CGTGACCTGACAGACTACCTCATGAAGATCCTGACTGAGAG<WGCTACAGCTTC?S3??Query?64?ACAACCACAGCCGAMGGGAAATTGTGCGTGATCTCAAAGAAAAGCTCTGCTATGTCGCC?123??Query?124?CTWACTTTGAGCAGGAAATGG?145??TT,?SSliliii?TO5??图3-6大鲵与红腹蝾螈P-actin基因序列的比对??Fig.3-6?Comparative?analysis?of?Cynops?pyrrhogaster?^-actin?with?the?Chinese?giant?salamander??3.2.4蓝白斑筛癣质粒线性化以及探针的制备??将2个含氨苄青霉素的固体培养基于37°C培养过夜,次日观察到2个培养皿??中均有蓝斑和白斑。颜色区分明显,菌落长势较好。??【U??图3-7阶基因克隆菌落图??Fig.3-7?Bacterial?colony?of?Wnt4?gene?clone??注:图中1和2均为基因克隆菌落图??3.2.5质粒测序??PCR扩增序列与pGEM?-T?Easy?Vector连接后,导入大肠杆菌DH5a感受态??细胞,提取重组质粒DNA,送至西安擎科生物有限公司测序,测序结果如下:??ATTCCAGTGGTCTGGCTGTTCAGATAACATTGCCTATGGTGTGGCATTCTCAC??32??

序列,线性化,质粒


TCTCACAATCTTT??ii?iii?i?iiiiii??l??TACTCAGTGTGGCTTCTCGCATCTTT??61?TGTT0AT0T0AGG0AGAGAAGCAAA00A0CGTCCTCTGGCAGAGCTCTCATGAATCTTCA??iiiiiimimMiiMiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiMiiiimiiii??27?TGnGATGTGAGGGAGAGAAGCAAAGGAGCGTCCTCTGGCAGAGCTCTCATGMTCTTa??图3-8质粒克隆写基因PCR序列的比对??Fig.3-8?Comparative?analysis?of?PCR?Wnt4?with?the?plasmid?clone??3.2.6质粒线性化??将质粒以及质粒线性化之后的产物进行琼脂糖凝胶电泳,电泳结果表明Pst?I??将环状质粒切割开。??图3-9质粒线性化前后的比对??Fig.3-9?Comparative?analysis?of?the?plasmid?linearization?from?before?and?after??33??


本文编号:3306966

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