海马皮质特异性敲除AEG-1基因小鼠的构建及其行为学初步研究

发布时间：2021-07-28 18:30

　　星形胶质细胞上调基因-1（astrocyte upregulating gene-1,AEG-1）是HIV伴随老年痴呆患者脑组织中发现的星形胶质细胞上调基因之一,近年来研究表明其调控多种中枢神经系统疾病,但其在学习认知上的研究尚未见报道。海马和皮质在学习认知中起重要作用,利用CRISPR/Cas9技术结合Cre/loxp系统构建海马皮质特异性AEG-1敲除小鼠,在此模型鼠的基础上对AEG-1和学习认知的相关性进行初步研究。首先构建插入loxp位点的flox纯合型AEG-1^fl/fl小鼠,与海马、新皮层特异性表达Cre^+/+重组酶的工具鼠进行繁育,利用PCR技术筛选出子代基因型为AEG-1^fl/flCre⁺的海马皮质特异性AEG-1敲除小鼠;然后利用Western blot技术和免疫荧光技术检测AEG-1基因在小鼠海马皮质中的敲除效率;最后应用新物体识别箱和三腔社会互动箱并结合SMART 3.0分析系统,对海马皮质特异性AEG-1敲除小鼠的学习记忆和社会交互行为学进行初步评价。结果显示:成功获得子代基... 

【文章来源】：中国生物工程杂志. 2020,40(11)北大核心CSCD

【文章页数】：11 页

【图文】：

AEG-1flox小鼠构建策略

AEG-1flox小鼠引物设计图

图3所示，基因型为AEG-1fl/fl的小鼠与海马、皮层特异性Cre+小鼠杂交。利用200μl GA缓冲液和20μl proteinase K溶解组织，待组织完全溶解后，利用组织DNA提取试剂盒进一步进行DNA的提取。通过PCR技术鉴定小鼠基因型，AEG-1fl/fl和Cre+均为阳性者为试验组小鼠(表2为鉴定AEG-1fl/fl Cre+所用引物)。1.2.3 PCR反应鉴定小鼠基因型


本文编号：3308420