小麦U-box基因TaPUB1在小麦耐盐性中的功能分析
发布时间：2021-08-01 09:21
小麦（Triticum aestivum L.）是世界上最重要的粮食作物之一。小麦在生长发育过程中经常受到各种逆境胁迫,特别是盐胁迫。泛素/26S蛋白酶体系统（UPS）是植物中最重要的蛋白质周转系统。该系统主要由泛素活化酶（E1）、泛素结合酶（E2）、泛素连接酶（E3）、26S蛋白酶体和泛素组成。研究发现UPS参与许多生物学过程,包括信号转导、细胞周期和逆境胁迫响应等。本实验室前期从小麦中克隆了U-box型E3连接酶基因,命名为TaPUB1。为深入研究该基因在小麦盐胁迫耐性中的功能,本研究中我们转化了小麦,获得了过表达和沉默TaPUB1转基因小麦株系。鉴定了转基因小麦株系的耐盐性,并分析了其生理及分子机制。主要结果如下:（1）通过PCR和qRT-PCR检测分析,对转基因小麦进行筛选鉴定,选择两个过表达株系（TaPUB1-OE3和TaPUB1-OE6）和两个沉默株系（TaPUB1-RNAi1和TaPUB1-RNAi5）进行后续实验。（2）对不同生育年龄的转基因小麦进行盐胁迫处理,结果发现,与野生型（WT）相比,过表达TaPUB1的小麦株系在盐胁迫下生长抑制程度低,幼根和幼叶生长快。而沉默...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
植物耐盐响应机制（Munnsetal.,2008）
本实验室前期获得 个U-box类型的E3连接酶基因，并命名为TaPUB1（GeneBankJX307854）。为研究 TaPUB1 在小麦中的作用，我们将该基因转化小麦，并获得了 100 多个独立的过表达和沉默 TaPUB1 的转基因小麦株系（图 3-1）。首先，利用常规 PCR 和实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）检测分析过表达纯合株系。常规 PCR 分析显示，大部分过表达植株为阳性（图 3-1A-B）。qRT-PCR 分析结果显示，有 7 个超表达 TaPUB1 的转基因株系，其中两个 T3代转基因株系（TaPUB1-OE3 和 TaPUB1-OE6）的 TaPUB1 表达量较高（图 3-1C）。此外，利用 RNA 干扰（RNAinterference，RNAi）方法构建独立的转基因小麦品系，常规 PCR 和 qRT-PCR 分析结果显示，与 WT 相比，阳性转基因株系中 TaPUB1 的表达量均减少，其中两个株系分别减少 65%（TaPUB1- RNAi1）和 60%（TaPUB1-RNAi5）（图 3-1E 和 3-1F）。根据转基因株系的鉴定结果，我们选择两个过表达株系 TaPUB1-OE3 和 TaPUB1-OE6，与两个基因沉默株系 TaPUB1-RNAi1 和 TaPUB1RNAi5 用于后续实验。
小麦 U-box 基因 TaPUB1 在小麦盐胁迫耐性中的功能分析麦幼苗期的耐盐性鉴定分析，盐胁迫诱导 TaPUB1 基因的转录表达，说明 TaPUB1hang et al., 2017a）。为选择合适的 NaCl 处理浓度，将水别含有不同浓度 NaCl 的培养基中（0mM、50mM、100m、300mM、350mM），处理 24h 后采集样品。将样品进行所有的 NaCl 浓度下，TaPUB1 转录表达水平均上调，且在平最高（图 3-2）。因此，我们选择 200mM NaCl 进行后
【参考文献】：
期刊论文
[1]我国盐碱地绿化研究进展与展望[J]. 朱建峰,崔振荣,吴春红,邓丞,陈军华,张华新. 世界林业研究. 2018(04)
[2]沿海地区盐碱农田改良现状及展望[J]. 陈传辉. 农业与技术. 2018(08)
[3]我国海水稻产业发展的战略选择[J]. 陈雨生,王平,王克响,陈宁,赵露. 中国海洋大学学报(社会科学版). 2018(01)
[4]苹果U-box型E3泛素连接酶MdPUB24的耐盐性和ABA敏感性鉴定[J]. 齐晨辉,赵先炎,韩朋良,姜翰,王永旭,胡大刚,郝玉金. 园艺学报. 2017(12)
博士论文
[1]大麦水杨酸合成途径及其应答赤霉菌侵染的机理研究[D]. 郝群群.山东农业大学 2018
[2]麦族抗条锈病基因WKS的克隆、遗传转化及其应用[D]. 姜辉.山东农业大学 2012
本文编号：3315256
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
植物耐盐响应机制（Munnsetal.,2008）
本实验室前期获得 个U-box类型的E3连接酶基因，并命名为TaPUB1（GeneBankJX307854）。为研究 TaPUB1 在小麦中的作用，我们将该基因转化小麦，并获得了 100 多个独立的过表达和沉默 TaPUB1 的转基因小麦株系（图 3-1）。首先，利用常规 PCR 和实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）检测分析过表达纯合株系。常规 PCR 分析显示，大部分过表达植株为阳性（图 3-1A-B）。qRT-PCR 分析结果显示，有 7 个超表达 TaPUB1 的转基因株系，其中两个 T3代转基因株系（TaPUB1-OE3 和 TaPUB1-OE6）的 TaPUB1 表达量较高（图 3-1C）。此外，利用 RNA 干扰（RNAinterference，RNAi）方法构建独立的转基因小麦品系，常规 PCR 和 qRT-PCR 分析结果显示，与 WT 相比，阳性转基因株系中 TaPUB1 的表达量均减少，其中两个株系分别减少 65%（TaPUB1- RNAi1）和 60%（TaPUB1-RNAi5）（图 3-1E 和 3-1F）。根据转基因株系的鉴定结果，我们选择两个过表达株系 TaPUB1-OE3 和 TaPUB1-OE6，与两个基因沉默株系 TaPUB1-RNAi1 和 TaPUB1RNAi5 用于后续实验。
小麦 U-box 基因 TaPUB1 在小麦盐胁迫耐性中的功能分析麦幼苗期的耐盐性鉴定分析，盐胁迫诱导 TaPUB1 基因的转录表达，说明 TaPUB1hang et al., 2017a）。为选择合适的 NaCl 处理浓度，将水别含有不同浓度 NaCl 的培养基中（0mM、50mM、100m、300mM、350mM），处理 24h 后采集样品。将样品进行所有的 NaCl 浓度下，TaPUB1 转录表达水平均上调，且在平最高（图 3-2）。因此，我们选择 200mM NaCl 进行后
【参考文献】：
期刊论文
[1]我国盐碱地绿化研究进展与展望[J]. 朱建峰,崔振荣,吴春红,邓丞,陈军华,张华新. 世界林业研究. 2018(04)
[2]沿海地区盐碱农田改良现状及展望[J]. 陈传辉. 农业与技术. 2018(08)
[3]我国海水稻产业发展的战略选择[J]. 陈雨生,王平,王克响,陈宁,赵露. 中国海洋大学学报(社会科学版). 2018(01)
[4]苹果U-box型E3泛素连接酶MdPUB24的耐盐性和ABA敏感性鉴定[J]. 齐晨辉,赵先炎,韩朋良,姜翰,王永旭,胡大刚,郝玉金. 园艺学报. 2017(12)
博士论文
[1]大麦水杨酸合成途径及其应答赤霉菌侵染的机理研究[D]. 郝群群.山东农业大学 2018
[2]麦族抗条锈病基因WKS的克隆、遗传转化及其应用[D]. 姜辉.山东农业大学 2012
本文编号：3315256
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3315256.html
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