CRISPR/Cas9基因编辑实验系统建立及CBX2调控性别发育基因的功能初探
发布时间：2021-08-02 02:21
CBX蛋白作为哺乳动物多梳抑制复合体PRC1的核心组分在干细胞干性维持和胚胎发育过程中发挥着重要的作用。哺乳动物CBX同源蛋白Cbx2敲除型小鼠出现雄性-雌性的性别逆转,类似的发育异常现象在人类Cbx2点突变的病例中也有报道。目前有一定实验证据表明CBX2可能通过调控性别决定基因Sry及Nr5a1基因的表达调控性别发育,但由于其效应显示为基因激活作用,与已知的PRC1抑制基因表达的效应不吻合,具体的调控机制目前还不明确。为了深入探究CBX2调控性别发育的机制,对Cbx2进行敲除和过表达等基因操作必不可少。而此时一种新型基因编辑系统CRISPR/Cas9应运而生,操作简便快速高效,因此本论文尝试应用了多种CRISPR/Cas9体系去进行Cbx2基因的敲除。通过建立并不断完善本实验室CRISPR/Cas9系统,得到了高效率的瞬时转染实验系统和慢病毒载体感染系统,并且构建了可诱导表达Cas9的多种细胞系,能够较为成熟简便地使用CRISPR/Cas9对人胚肾细胞HEK293T、小鼠胚胎干细胞E14TG2a和小鼠睾丸畸胎瘤细胞F9等不同细胞系进行基因编辑。目前已使用瞬时转染系统得到了纯合型和杂合...
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PRC1分类示意图[13]
兰州大学硕士研究生学位论文 CRISPR/Cas9 基因编辑实验系统建立及 CBX2 调控性别发育基因的功能初探RING1B[62, 63]。与染色质结构域相邻，这些 CBX 同源物具有 DNA 结合基序AT-Hook（在 CBX2 中）或 AT-Hook Like 基序（在其他四个 CBX 蛋白中）[64]。CBX 蛋白中这些较不保守的序列可以将每个 CBX 家族成员特异性地导向染色质的不同区域[65]。
图 1-6 通过强制表达 Sry 或 Sox9 获得的 Cbx2 KO 成年性腺的总体形态[1]表 1-4 性别发育相关基因的功能基因 功能 引用sf1 与性腺中支持细胞和间质细胞的形成有关，并介导 SRY 表达上调 [6]Wt1 Wt1 突变的小鼠肾脏和性腺不发育，通常在胚胎阶段即死于心脏缺陷 [12]Gata4 与 SF1，FOG2，WT1 等协同作用，调节 SRY、SOX9、AMH 等性别相关基因的表达 [15]Lhx9 Lhx9 缺失的小鼠，其胚胎时期原始生殖细胞可正常迁移，但生殖腺嵴中体细胞无法增殖，性腺形成受阻，由于缺乏睾酮和 AMH，XY 小鼠表型为雌性[17]Cbx2（M33） XY 小鼠体内，M33 基因缺失导致性逆转；在 XX 小鼠则体现为卵巢的体积减小或缺失[1]Insr 缺乏功能性 INS/IGF 信号的胚胎表现出：肾上腺皮质完全不发育；XY 性腺性逆转；卵巢分化延迟，即 XX 和 XY 性腺未分化状态延长Igflr1Sry Y 染色体上决定雄性性别的基因片段，在性别决定中起开关作用Sox9 条件敲除 Sox9 基因的小鼠 XY 胚胎出现卵巢发育，而过度表达 Sox9 的 XX 胚胎出现睾丸发育[18]
【参考文献】：
期刊论文
[1]多梳抑制复合体PRC1的核心组分CBX家族蛋白在表观遗传调控中的作用（英文）[J]. Rong-gang MA,Yang ZHANG,Ting-ting SUN,Bo CHENG. Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology）. 2014(05)
[2]46,XY女性性逆转患者的NR5A1基因突变分析[J]. 陈雪娇,许惠惠,潘映秋,戴美珍,范历龙,章鸯. 医学研究杂志. 2013(03)
[3]合肥地区性逆转综合征患者遗传学研究[J]. 赵保静,袁静,方慧琴,李从青,丛林. 中国优生与遗传杂志. 2012(10)
本文编号：3316694
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PRC1分类示意图[13]
兰州大学硕士研究生学位论文 CRISPR/Cas9 基因编辑实验系统建立及 CBX2 调控性别发育基因的功能初探RING1B[62, 63]。与染色质结构域相邻，这些 CBX 同源物具有 DNA 结合基序AT-Hook（在 CBX2 中）或 AT-Hook Like 基序（在其他四个 CBX 蛋白中）[64]。CBX 蛋白中这些较不保守的序列可以将每个 CBX 家族成员特异性地导向染色质的不同区域[65]。
图 1-6 通过强制表达 Sry 或 Sox9 获得的 Cbx2 KO 成年性腺的总体形态[1]表 1-4 性别发育相关基因的功能基因 功能 引用sf1 与性腺中支持细胞和间质细胞的形成有关，并介导 SRY 表达上调 [6]Wt1 Wt1 突变的小鼠肾脏和性腺不发育，通常在胚胎阶段即死于心脏缺陷 [12]Gata4 与 SF1，FOG2，WT1 等协同作用，调节 SRY、SOX9、AMH 等性别相关基因的表达 [15]Lhx9 Lhx9 缺失的小鼠，其胚胎时期原始生殖细胞可正常迁移，但生殖腺嵴中体细胞无法增殖，性腺形成受阻，由于缺乏睾酮和 AMH，XY 小鼠表型为雌性[17]Cbx2（M33） XY 小鼠体内，M33 基因缺失导致性逆转；在 XX 小鼠则体现为卵巢的体积减小或缺失[1]Insr 缺乏功能性 INS/IGF 信号的胚胎表现出：肾上腺皮质完全不发育；XY 性腺性逆转；卵巢分化延迟，即 XX 和 XY 性腺未分化状态延长Igflr1Sry Y 染色体上决定雄性性别的基因片段，在性别决定中起开关作用Sox9 条件敲除 Sox9 基因的小鼠 XY 胚胎出现卵巢发育，而过度表达 Sox9 的 XX 胚胎出现睾丸发育[18]
【参考文献】：
期刊论文
[1]多梳抑制复合体PRC1的核心组分CBX家族蛋白在表观遗传调控中的作用（英文）[J]. Rong-gang MA,Yang ZHANG,Ting-ting SUN,Bo CHENG. Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology）. 2014(05)
[2]46,XY女性性逆转患者的NR5A1基因突变分析[J]. 陈雪娇,许惠惠,潘映秋,戴美珍,范历龙,章鸯. 医学研究杂志. 2013(03)
[3]合肥地区性逆转综合征患者遗传学研究[J]. 赵保静,袁静,方慧琴,李从青,丛林. 中国优生与遗传杂志. 2012(10)
本文编号：3316694
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3316694.html
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