马铃薯StWRKY57基因响应干旱胁迫的功能鉴定
发布时间：2021-08-03 04:52
WRKY转录因子是高等植物中最大的转录因子家族之一,它可以与靶基因的顺式作用元件互作后对目标基因进行调控。WRKY转录因子可以调控植物的生长发育、生物学代谢以及抗逆过程,研究发现过表达WRKY基因可以提高植物对于干旱、盐碱、高温的耐受性以及对病菌的耐受性,但目前对于马铃薯WRKY转录因子介导的信号转导研究较少,因此本研究通过构建马铃薯WRKY基因的过表达与干扰表达载体以及酵母双杂技术筛选与WRKY基因互作的蛋白,来研究WRKY基因的生物学特性和响应马铃薯抗干旱胁迫的机制,为进一步研究WRKY基因在马铃薯抗干旱胁迫方面的代谢途径提供理论基础。主要研究结果如下:1.马铃薯StWRKY57基因的生物信息学分析:StWRKY57基因位于8号染色体上,CDS区长762 bp,含有4个外显子,该基因共编码253个氨基酸,其编码的蛋白相对分子量为28.72 kDa,理论等电点为8.84,不稳定系数为57.47,脂肪系数为75.53,总平均亲水性为-0.653,说明该蛋白为疏水性蛋白且该蛋白具有跨膜结构。利用同源重组法成功构建瞬时表达载体pEGFP-WRKY,并使用农杆菌介导的转化法转染烟草,通过激光...
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
酵母双杂交原理
图 1.2 酵母双杂交系统中报告基因的构建系统ig.1.2 Reporter gene construction system in yeast two-hybrid syste用的是 Y2HGold 和 Y187 这两种经过改造的酵母菌株株不含可以编码转录因子的基因，保留了特定的报告基C 和 MEL1）及其上游活化序列，因此它们不具有可以1.2）[164,165]。将转入不同外源转录因子的酵母菌株杂交以激活报告基因的转录[166,167]。BD 结合目的基因（诱诱饵蛋白，AD 结合靶基因成为猎物蛋白，将 BD-诱饵交后的酵母细胞中表达，若这两个蛋白能够互作，则可录因子从而激活下游报告基因的表达，若两个蛋白不互复合体与上游的活化序列结合，从而不能激活下游报告
图 2.1 StWRKY57 的基因结构Fig.2.1 The structures of StWRKY57 gene注: 内含子和外显子分别用细线条和粗线条表示Note: Introns and exons were represented by lines and filled boxes, respectivelyWRKY57 蛋白质特性在线软件 ProtParam 对马铃薯 StWRKY57 所编码的蛋白的理化性质进行果表明该基因可以编码 253 个氨基酸，蛋白的相对分子量为 28.72 kDa，点为 8.84，负电荷残基总数（Asp+Glu）为 28 个，正电荷残基总数s）为 33 个，分子式为 C1259H2015N353O396S9，原子总数为 4032，不稳定.47，脂肪系数为 75.53，总平均亲水性为-0.653，说明该蛋白为疏水性图 2.2）。利用 TMAP 分析显示该蛋白具有跨膜结构（图 2.3）。表 2.1 马铃薯 StWRKY57 蛋白氨基酸种类和数量Table 2.1 StWRKY57 of potato protein amino acid types and quantities残基数量百分比（%）
【参考文献】：
期刊论文
[1]氮素对马铃薯品种东农311产量及品质的影响[J]. 田洵,魏峭嵘,梁晓丽,祁驰恒,石瑛. 基因组学与应用生物学. 2015(09)
[2]植物WRKY转录因子家族GroupⅡa基因研究进展[J]. 罗昌国,袁启凤,裴晓红,吴亚维,郑伟,章镇. 热带作物学报. 2015(03)
[3]WRKY转录调控因子在植物与病原体互作中的功能[J]. 伍林涛,万谦,韩宏仕,奉斌,康公平,曾章丽. 基因组学与应用生物学. 2014(06)
[4]CryⅢA基因植物表达载体构建及马铃薯遗传转化[J]. 尤佳,张宁,文义凯,吴家和,司怀军,王蒂. 草业学报. 2014(01)
[5]苎麻WRKY转录因子的序列分析[J]. 付莉莉,刘头明,朱四元,汤清明,唐守伟. 中国麻业科学. 2013(03)
[6]植物MYB转录因子功能及调控机制研究进展[J]. 左然,徐美玲,柴国华,周功克. 生命科学. 2012(10)
[7]植物WRKY转录因子的结构特点及其在植物防卫反应中的作用[J]. 贾翠玲,侯和胜. 天津农业科学. 2010(02)
[8]WRKY转录因子功能研究进展[J]. 张娟. 西北植物学报. 2009(10)
[9]AP2/EREBP转录因子在植物发育和胁迫应答中的作用[J]. 赵利锋,柴团耀. 植物学通报. 2008(01)
[10]干旱胁迫对玉米幼苗生理特性的影响[J]. 张艳馥,沙伟,徐忠文. 种子. 2007(06)
博士论文
[1]马铃薯抗逆相关基因SnRK2家族的克隆与功能分析[D]. 毛娟.甘肃农业大学 2014
硕士论文
[1]津田芜菁花青素调控基因的克隆及转化菊花的研究[D]. 刘振华.东北林业大学 2010
本文编号：3318971
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
酵母双杂交原理
图 1.2 酵母双杂交系统中报告基因的构建系统ig.1.2 Reporter gene construction system in yeast two-hybrid syste用的是 Y2HGold 和 Y187 这两种经过改造的酵母菌株株不含可以编码转录因子的基因，保留了特定的报告基C 和 MEL1）及其上游活化序列，因此它们不具有可以1.2）[164,165]。将转入不同外源转录因子的酵母菌株杂交以激活报告基因的转录[166,167]。BD 结合目的基因（诱诱饵蛋白，AD 结合靶基因成为猎物蛋白，将 BD-诱饵交后的酵母细胞中表达，若这两个蛋白能够互作，则可录因子从而激活下游报告基因的表达，若两个蛋白不互复合体与上游的活化序列结合，从而不能激活下游报告
图 2.1 StWRKY57 的基因结构Fig.2.1 The structures of StWRKY57 gene注: 内含子和外显子分别用细线条和粗线条表示Note: Introns and exons were represented by lines and filled boxes, respectivelyWRKY57 蛋白质特性在线软件 ProtParam 对马铃薯 StWRKY57 所编码的蛋白的理化性质进行果表明该基因可以编码 253 个氨基酸，蛋白的相对分子量为 28.72 kDa，点为 8.84，负电荷残基总数（Asp+Glu）为 28 个，正电荷残基总数s）为 33 个，分子式为 C1259H2015N353O396S9，原子总数为 4032，不稳定.47，脂肪系数为 75.53，总平均亲水性为-0.653，说明该蛋白为疏水性图 2.2）。利用 TMAP 分析显示该蛋白具有跨膜结构（图 2.3）。表 2.1 马铃薯 StWRKY57 蛋白氨基酸种类和数量Table 2.1 StWRKY57 of potato protein amino acid types and quantities残基数量百分比（%）
【参考文献】：
期刊论文
[1]氮素对马铃薯品种东农311产量及品质的影响[J]. 田洵,魏峭嵘,梁晓丽,祁驰恒,石瑛. 基因组学与应用生物学. 2015(09)
[2]植物WRKY转录因子家族GroupⅡa基因研究进展[J]. 罗昌国,袁启凤,裴晓红,吴亚维,郑伟,章镇. 热带作物学报. 2015(03)
[3]WRKY转录调控因子在植物与病原体互作中的功能[J]. 伍林涛,万谦,韩宏仕,奉斌,康公平,曾章丽. 基因组学与应用生物学. 2014(06)
[4]CryⅢA基因植物表达载体构建及马铃薯遗传转化[J]. 尤佳,张宁,文义凯,吴家和,司怀军,王蒂. 草业学报. 2014(01)
[5]苎麻WRKY转录因子的序列分析[J]. 付莉莉,刘头明,朱四元,汤清明,唐守伟. 中国麻业科学. 2013(03)
[6]植物MYB转录因子功能及调控机制研究进展[J]. 左然,徐美玲,柴国华,周功克. 生命科学. 2012(10)
[7]植物WRKY转录因子的结构特点及其在植物防卫反应中的作用[J]. 贾翠玲,侯和胜. 天津农业科学. 2010(02)
[8]WRKY转录因子功能研究进展[J]. 张娟. 西北植物学报. 2009(10)
[9]AP2/EREBP转录因子在植物发育和胁迫应答中的作用[J]. 赵利锋,柴团耀. 植物学通报. 2008(01)
[10]干旱胁迫对玉米幼苗生理特性的影响[J]. 张艳馥,沙伟,徐忠文. 种子. 2007(06)
博士论文
[1]马铃薯抗逆相关基因SnRK2家族的克隆与功能分析[D]. 毛娟.甘肃农业大学 2014
硕士论文
[1]津田芜菁花青素调控基因的克隆及转化菊花的研究[D]. 刘振华.东北林业大学 2010
本文编号：3318971
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3318971.html
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