‘云香’水仙ACS基因和ACO基因的克隆分析及遗传转化

发布时间：2021-08-03 05:24

　　’云香’水仙（Narcissus tazettavar.’Yunxiang’）[1-2]是福建农林大学园艺遗传育种研究所选育的多花水仙新品种,2012年4月1日通过福建省农作物品种审定委员会认定,与其他水仙品种相比,’云香’水仙花朵大、花朵数量多、花期长、香气浓,花葶挺立,可用作切花。但是切花对贮藏保鲜和花期要求很高。本研究从’云香’水仙花瓣中分离乙烯生物合成途径关键酶基因ACS和ACO基因,对其进行表达分析和载体构建,并通过农杆菌介导法转化烟草,获得转基因植株,为进一步鉴定所分离基因功能和后续转化水仙提供试验基础。最终通过基因工程调节乙烯代谢途径来获得更长贮藏保鲜期的’云香’水仙,以拓展多花水仙的用途,使其更适于用作鲜切花。本研究主要结果如下:1.探究了多花水仙ACS基因的序列特征及功能,以’云香’水仙盛花期花瓣为试验材料,根据’云香’水仙花朵转录组数据信息,通过RT-PCR方法克隆出1个ACS基因,命名为NtACS1（Genbank登录号为KX082936）,其开放阅读框（ORF）长度为552bp,编码183个氨基酸。编码蛋白质分子量约为20.6 kD,理论等电点为6.30,不稳定... 

【文章来源】：福建农林大学福建省

【文章页数】：94 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－１提取的总ＲＮＡ琼脂糖凝胶电泳??Ｆｉｇ．?２－１?Ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ??

使用东盛生物通用ＲＮＡ提取试剂盒Ｒ１０５１提取‘云香’水仙盛花期花瓣总??ＲＮＡ，通过核酸蛋白测定仪进行检测（表２－７）。取５ｕｌ进行琼脂糖凝胶电泳检??测，电泳结果如图２－１所示，ＲＮＡ条带完整，分别为２８Ｓ、１８Ｓ和５ＳＲＮＡ，且??２８Ｓ条带亮度是１８Ｓ条带的两倍，说明提取的水仙盛开期花瓣总ＲＮＡ质量良好，??可用于后续试验。以‘云香’水仙盛花期花瓣ｃＤＮＡ为模板，用特异性引物进行??ＰＣＲ扩增，产物进行电泳检测，得到一条特异的条带，与预期基因片段大小一??致（图２－２）。测序结果显示，基因的全长为５７８?ｂｐ，开放阅读框（ＯＲＦ）为５５２??ｂｐ，编码１８３个氨基酸。将这个基因命名为ｉＶ＾ＣＳ７。??表２－７?ＲＮＡ质量检測结果??Ｔａｂｌｅ?２－７?Ｑｕａｌｉｔｙ?ｔｅｓｔ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ＲＮＡ??项目?＾??（Ｐｒｏｊｅｃｔ）?（Ｒｅｓｕｌｔ）??Ａ２６０／Ａ２８０?２．１６??Ａ２６０／Ａ２３０?１．７２??浓度（ｎｇ／｜ｉＬ）?６０８．５８???ｊ．??图２－１提取的总ＲＮＡ琼脂糖凝胶电泳??Ｆｉｇ．?２－１?Ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌ

ｈｔ?ｈｈｈｈｈｈｈｈｈｈｈｈｈｈｈｈｈｅ?ｔｔ．?ｅｓｈｈｈｈ??图２－３?ＮｔＡＣＳｌ蛋丨＇丨二级结构预测??Ｃ：随机卷曲ｔ：?ｐ转炻ｅ：延伸链ｈ：?ｃｔ螺旋??Ｆｉｇ．?２－３?Ｔｈｅ?ｓｅｃｏｎｄａｒｙ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ＮｔＡＣＳｌ?ｐｒｏｔｅｉｎ．??Ｃ：?Ｒａｎｄｏｍ?ｃｏｉｌ?ｔ：?Ｂｅｔａ?ｔｕｒｎ?ｃ：?Ｅｘｔｅｎｄｅｄ?ｓｔｒａｎｄ?ｈ：?Ａｌｐｈａ?ｈｅｌｉｘ??ｉｍ??图２－４?Ｐｈｙｒｃ２预测的‘云香’水仙ＡＷ?ＣＳ７蛋白三级结构??Ｆｉｇ．２－４?Ｔｈｅ?ｔｅｒｔｉａｒｙ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ＮｔＡＣＳｌ?ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ?ｂｙ?Ｐｈｙｒｅ２??３．３?ＮｔＡＣＳｌ蛋白的基本特性分析??利用ＳｉｇｎａｌＰ４．１Ｓｅ；ｆＶｅｒ对氨雄酸序列信号肽进行预测（附图Ｃｌ）。结果表明，??ＮｔＡＣＳｌ原始剪切位点（Ｃ?ｓｃｏｒｅ）最高在第２６个氨基酸位置，分值为０．１６９，综??合剪切点分值（Ｙ?ｓｃｏｒｅ）在第２６个氨基酸处最大，分值为０．１８０，信号肽分值??（Ｓ?ｓｃｏｒｅ）最大在第］３个氨基酸位置，为０．２８７，ＭＪＣＳ７第〗？２５个氨基酸的??平均Ｓｓｃｏｒｅ为０．１９５，因此推断ＭＡＣＳＩ没有信号肽，不是分泌型蛋｜与。利Ｊｌｊ??Ｐｒｏｔｐａｒａｍ等在线：丨：具预测ＮｔＡＣＳｌｌＫ丨４的越本理化性质（表２－８），结來－表明，??ＮｔＡＣＳｌ蛋白相对分子质遒约为２０．６?ｋＤ，等电点为６．３０，分子式为??Ｃ９ｍＨ１４４７Ｎ２４９〇２６６Ｓ１５


本文编号：3319024