细粒棘球绦虫肌动蛋白基因的克隆表达

发布时间：2021-08-03 20:47

　　目的克隆表达细粒棘球绦虫肌动蛋白（EgACT）基因,并获得EgACT纯化蛋白。方法将经全序列合成、密码子优化合成的目的基因EgACT克隆入PET28a-SUMO表达载体中、转化入Rosetta（DE3）中,诱导表达采用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）,经镍琼脂糖凝胶亲和层析法获得纯化蛋白。结果重组质粒PET28a-SUMO-EgACT构建成功。SDS-PAGE结果显示,目的蛋白在Rosetta（DE3）中获得高效表达,相对分子量约为60 kDa。结论完成细粒棘球绦虫肌动蛋白基因的克隆及其在Rosetta（DE3）中的表达,并获得纯化蛋白。 

【文章来源】：中国高原医学与生物学杂志. 2020,41(02)

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

重组质粒p ET28a-SUMO-Eg ACT酶切鉴定图

诱导表达结果表明，EgA CT蛋白在20℃和37℃沉积物中具有可见带(图2)。利用镍琼脂凝胶亲和色谱法进行蛋白质纯化，EgA CT蛋白在500 mM咪唑浓度时，被大量洗脱下来(图3)。图3 镍琼脂糖亲和层析SDS-PAGE分析图

镍琼脂糖亲和层析SDS-PAGE分析图

【参考文献】：
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本文编号：3320310