桔小实蝇flightin基因RNAi载体构建

发布时间：2021-08-04 06:39

　　以云南省林业和草原科学院森保所室内饲养的桔小实蝇为材料,采用RT-PCR技术,克隆桔小实蝇（Bactrocera dorsalis Hendel.）flightin的基因片段,并以此为靶标,设计有效的干扰片段,以线虫RNAi干扰载体L4440为载体,构建桔小实蝇flightin基因RNAi载体。通过PCR、酶切检测及测序,证明表达载体构建正确。本研究为通过RNAi研究桔小实蝇flightin的基因功能奠定了基础。 

【文章来源】：西部林业科学. 2020,49(04)北大核心

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

桔小实蝇总RNA提取结果

把载体质粒L4440和胶回收得到的目的片段分别经限制性内切酶SacI和XhoI在37℃下,双酶切1h后,电泳检测结果见图2的2、5、6泳道。L4440质粒大小为2 790 bp,经SacI和XhoI双酶切后,得到的线性化载体片段约为2 755 bp(图2的2泳道),大小正确。桔小实蝇flightin基因及对照egfp基因经双酶切后位置同3、4泳道的PCR产物。2.3 桔小实蝇flightin基因及对照egfp基因干扰 表达载体检测

重组质粒L4440-flightin和L4440-egfp经双酶切后,1%琼脂糖凝胶电泳20min检测均分别得到两条带,2 755bp的线性化L4440质粒载体,及678bp和187bp左右的目的片段(图3),表明桔小实蝇flightin基因和egfp基因片段成功转入L4440质粒中,与预期设计一致。将鉴定为阳性克隆的菌液送测序,双向测序结果与目的基因序列完全一致,阅读框正确,说明已经成功构建了L4440-flightin和L4440-egfp干扰表达载体。3 结论与讨论

【参考文献】：
期刊论文
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[3]中国桔小实蝇种群的微卫星多态性分析[J]. 李伟丰,杨朗,唐侃,曾玲,梁广文.  昆虫学报. 2007(12)
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[5]昆虫飞行肌蛋白质[J]. 杨璞,余海忠,程家安,祝增荣.  昆虫知识. 2005(06)



本文编号：3321208