猪NLRP6基因表达载体构建及其多克隆抗体的制备

发布时间：2021-08-04 21:28

　　核苷酸结合寡聚化结构域受体（NOD-like receptors,NLRs）是先天性免疫中病原识别受体之一,在机体防御中起着重要作用。NLRP6是NOD样家族中一类作用机理比较特别的蛋白,在免疫中的作用与其调节caspase-1和NF-κB活性的能力有关。本试验以猪NLRP6基因为研究对象。依据猪NLRP6全基因核苷酸序列（GenBank登录号:XM-003124236.4）设计特异性引物,利用PCR从pMD-19T-NLRP6重组载体中扩增获得NLRP6基因,将该基因片段连接到原核表达载体pET-32a（+）中,获得重组表达质粒pET-32a-NLRP6,通过抗性筛选、酶切、PCR鉴定重组质粒。将重组质粒pET-32a-NLRP6转化至大肠杆菌Rosetta（DE3）感受态细胞,IPTG诱导其高效表达,获得分子量大小约为34KDa的以包涵体形式存在的NLRP6重组融合蛋白,Western blot结果表明其与小鼠抗6×His单克隆抗体呈阳性反应。NLRP6重组融合蛋白经镍离子柱纯化、变性和复性后,即获得了可溶性NLRP6重组融合蛋白。以纯化的融合蛋白作为抗原,按合理免疫程序免疫BAL... 

【文章来源】：天津农学院天津市

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

NLRP6分子结构

pET-32a（+）载体的限制性酶切图和多克隆位点Fig.2-1RestrictionmapsandmultiplecloningsitesofthepET-32a(+)vector

NLRP目的片段PCR扩增Fig.2-2PCRamplificationofNLRPtargetfragment


本文编号：3322438