西瓜噬酸菌hrcQ、abmR和abmK基因功能分析
发布时间：2021-08-05 10:23
瓜类细菌性果斑病（bacterial fruit blotch,BFB）由革兰氏阴性细菌——西瓜噬酸菌（Acidovorax citrulli）引起,该病害是威胁世界西甜瓜产业的一种毁灭性的种传病害。它可以在西瓜和甜瓜上快速传播并造成严重损失,同时也可以危害其它葫芦科作物,如:黄瓜、南瓜等。Ⅲ型分泌系统（type Ⅲ secretion system,T3SS）和双组分信号传导系统（two-component signal transduction system,TCSTS）是革兰氏阴性细菌的关键毒力因子,二者可以参与并调节多种反应,如:生理生化反应和细胞的生命活动等。为明确Ⅲ型分泌系统基因hrcQ、双组分传导系统基因abmK和abmR对西瓜噬酸菌的影响,本文分别构建了三者的敲除载体,通过同源重组方法筛选得到ΔhrcQ、ΔabmK和ΔabmR突变菌株,将突变株与野生菌株和互补菌株一同进行致病性及与致病能力相关的一系列表型测定,并通过实时荧光定量对相关基因的表达量进行了分析。结果显示:（1）hrcQ、abmK和abmR生物信息学分析HrcQ仅含有一个FliMN结构;Abmk中含有TM、P...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
果斑病在世界范围内的发生情况
中国农业科学院硕士学位论文 第一章 引言1.1.2 瓜类细菌性果斑为害症状瓜类细菌性果斑病可以在寄主植物的整个生长周期内对植株产生影响，包括植株的子叶、真叶、果实等。染病初期会在子叶的背面形成水浸状病斑，病斑最初呈离散分布，后沿叶脉逐渐扩展，连接成片，通过茎部到达真叶的组织，造成整个幼苗的坏死。在染病后期，病斑逐渐变干，并形成狭长，暗红色的枯斑。果实染病的典型特点是在瓜类果实表皮上形成零星的病斑，随后蔓延至整个果皮表面；同时，也可以向内侵入果实，严重情况下造成果肉腐烂。在香瓜叶片上，病斑由棕褐色变成红棕色，并从叶片边缘扩展呈 V 字形病斑。南瓜上除出现以上症状外，也可能出现大面积的黄萎。在果斑病的整个循环期中，最主要的初侵染源是带菌种子。带菌种子植入土壤，出苗后 6-10天可显症。此外，温室和高温高湿的环境条件，极易造成果斑病的流行。
图 1.3 透射电子显微镜下及 KB 培养基中的西瓜噬酸菌Fig.1.3 A. citrulli in transmission electron microscopy and KB mediumA：透射电镜下的鞭毛形态；B：KB 培养基中的菌落形态A: Flagellar morphology under transmission electron microscope; B: Colony morphology in KB medium.1.4 西瓜噬酸菌的检测鉴定常见的西瓜噬酸菌的检测鉴定技术包括表型分析法、血清学方法（酶联免疫吸附、单克隆等）、分子生物学方法（常规 PCR、Real-time PCR、BIO-PCR 等）等等。血清学方法通常会利用抗原抗体杂交从而实现对病原菌的快速检测。Ha 等建立的改AS-Dot-ELISA 法可减少抗原抗体的非特异性结合，从而提高了西瓜噬酸菌的检测效率（Ha et 009）。Zeng 等首次采用异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate, FITC）标记的方法，制备流免疫层析试纸，该试纸减少了果斑病检测的步骤，并有效地缩短了检测时间。相较于传统型分析，血清学等方法，这种荧光素标记的方法优点显著，如：灵敏度高、特异性强、检测短等，适用于海关检疫及发病初期的快速检测鉴定（Zeng et al., 2017）。分子生物学技术也广泛应用于该病害的检测中，目前，锁式探针（padlock probe, PLP）和交（dot-blot hybridization）技术可在病菌在基因组 DNA 浓度为 100 fg 阈值下被检出（Tian et
【参考文献】：
期刊论文
[1]西瓜噬酸菌趋化性及鞭毛素基因ΔcheAΔfliC双突变体构建及功能[J]. 张爱萍,张晓晓,吴林娜,于畅,乔培,杨玉文,关巍,赵廷昌. 农业生物技术学报. 2017(11)
[2]西瓜噬酸菌Aac-5AAA ATPases基因moxR和ruvB功能研究[J]. 李晶,杨玉文,赵廷昌. 植物病理学报. 2016(06)
[3]LuxR家族调控因子LuxR-2460对西瓜嗜酸菌致病力及生物膜形成的调控（英文）[J]. 王铁霖,杨玉文,赵廷昌. 植物病理学报. 2016(03)
[4]瓜类细菌性果斑病菌hrcN基因的生物学功能分析[J]. 严婉荣,王铁霖,杨玉文,戴良英,赵廷昌. 植物病理学报. 2015(01)
[5]甜瓜细菌性果斑病生防菌株BW-6的筛选和鉴定[J]. 吴丽媛,刘宝玉,王钰杰,刘双平,赵廷昌,胡俊. 植物保护. 2014(01)
[6]HrcQ is necessary for Xanthomonas oryzae pv. oryzae HR-induction in non-host tobacco and pathogenicity in host rice[J]. Xiaoping Zhang,Chunlian Wang,Chongke Zheng,Jinying Che,Yanqiang Li,Kaijun Zhao. The Crop Journal. 2013(02)
[7]水稻细菌性条斑病菌RpfCxoc/RpfGxoc双组分系统的功能[J]. 赵延存,刘春晖,钱国良,殷芳群,周奕景,宋志伟,刘凤权. 微生物学报. 2012(04)
[8]药物浸种处理防治西瓜嫁接苗细菌性果斑病试验[J]. 何毅,韦志扬,李文信,覃斯华,黄金艳,洪日新,李天艳. 南方农业学报. 2011(05)
[9]hrpD6基因决定白叶枯病菌在烟草上的过敏反应和在水稻上的致病性[J]. 郭晓霞,邹华松,李玉蓉,邹丽芳,陈功友. 微生物学报. 2010(09)
[10]甜瓜细菌性果斑病菌致病性突变体筛选与hrcR基因的克隆[J]. 任争光,侯磊,宋治国,张力群. 植物病理学报. 2009(05)
博士论文
[1]骆驼刺中慢生根瘤菌CCNWXJ12-2T盐胁迫转录组分析及与耐盐相关基因功能研究[D]. 柳晓东.西北农林科技大学 2016
[2]西瓜噬酸菌越冬能力及两菌群在同一寄主定殖动态差异研究[D]. 孙柏欣.沈阳农业大学 2016
[3]西瓜食酸菌（Acidovorax citrulli）Ⅲ型分泌系统抑制剂的高通量筛选[D]. 陈亮.中国农业大学 2016
本文编号：3323585
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
果斑病在世界范围内的发生情况
中国农业科学院硕士学位论文 第一章 引言1.1.2 瓜类细菌性果斑为害症状瓜类细菌性果斑病可以在寄主植物的整个生长周期内对植株产生影响，包括植株的子叶、真叶、果实等。染病初期会在子叶的背面形成水浸状病斑，病斑最初呈离散分布，后沿叶脉逐渐扩展，连接成片，通过茎部到达真叶的组织，造成整个幼苗的坏死。在染病后期，病斑逐渐变干，并形成狭长，暗红色的枯斑。果实染病的典型特点是在瓜类果实表皮上形成零星的病斑，随后蔓延至整个果皮表面；同时，也可以向内侵入果实，严重情况下造成果肉腐烂。在香瓜叶片上，病斑由棕褐色变成红棕色，并从叶片边缘扩展呈 V 字形病斑。南瓜上除出现以上症状外，也可能出现大面积的黄萎。在果斑病的整个循环期中，最主要的初侵染源是带菌种子。带菌种子植入土壤，出苗后 6-10天可显症。此外，温室和高温高湿的环境条件，极易造成果斑病的流行。
图 1.3 透射电子显微镜下及 KB 培养基中的西瓜噬酸菌Fig.1.3 A. citrulli in transmission electron microscopy and KB mediumA：透射电镜下的鞭毛形态；B：KB 培养基中的菌落形态A: Flagellar morphology under transmission electron microscope; B: Colony morphology in KB medium.1.4 西瓜噬酸菌的检测鉴定常见的西瓜噬酸菌的检测鉴定技术包括表型分析法、血清学方法（酶联免疫吸附、单克隆等）、分子生物学方法（常规 PCR、Real-time PCR、BIO-PCR 等）等等。血清学方法通常会利用抗原抗体杂交从而实现对病原菌的快速检测。Ha 等建立的改AS-Dot-ELISA 法可减少抗原抗体的非特异性结合，从而提高了西瓜噬酸菌的检测效率（Ha et 009）。Zeng 等首次采用异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate, FITC）标记的方法，制备流免疫层析试纸，该试纸减少了果斑病检测的步骤，并有效地缩短了检测时间。相较于传统型分析，血清学等方法，这种荧光素标记的方法优点显著，如：灵敏度高、特异性强、检测短等，适用于海关检疫及发病初期的快速检测鉴定（Zeng et al., 2017）。分子生物学技术也广泛应用于该病害的检测中，目前，锁式探针（padlock probe, PLP）和交（dot-blot hybridization）技术可在病菌在基因组 DNA 浓度为 100 fg 阈值下被检出（Tian et
【参考文献】：
期刊论文
[1]西瓜噬酸菌趋化性及鞭毛素基因ΔcheAΔfliC双突变体构建及功能[J]. 张爱萍,张晓晓,吴林娜,于畅,乔培,杨玉文,关巍,赵廷昌. 农业生物技术学报. 2017(11)
[2]西瓜噬酸菌Aac-5AAA ATPases基因moxR和ruvB功能研究[J]. 李晶,杨玉文,赵廷昌. 植物病理学报. 2016(06)
[3]LuxR家族调控因子LuxR-2460对西瓜嗜酸菌致病力及生物膜形成的调控（英文）[J]. 王铁霖,杨玉文,赵廷昌. 植物病理学报. 2016(03)
[4]瓜类细菌性果斑病菌hrcN基因的生物学功能分析[J]. 严婉荣,王铁霖,杨玉文,戴良英,赵廷昌. 植物病理学报. 2015(01)
[5]甜瓜细菌性果斑病生防菌株BW-6的筛选和鉴定[J]. 吴丽媛,刘宝玉,王钰杰,刘双平,赵廷昌,胡俊. 植物保护. 2014(01)
[6]HrcQ is necessary for Xanthomonas oryzae pv. oryzae HR-induction in non-host tobacco and pathogenicity in host rice[J]. Xiaoping Zhang,Chunlian Wang,Chongke Zheng,Jinying Che,Yanqiang Li,Kaijun Zhao. The Crop Journal. 2013(02)
[7]水稻细菌性条斑病菌RpfCxoc/RpfGxoc双组分系统的功能[J]. 赵延存,刘春晖,钱国良,殷芳群,周奕景,宋志伟,刘凤权. 微生物学报. 2012(04)
[8]药物浸种处理防治西瓜嫁接苗细菌性果斑病试验[J]. 何毅,韦志扬,李文信,覃斯华,黄金艳,洪日新,李天艳. 南方农业学报. 2011(05)
[9]hrpD6基因决定白叶枯病菌在烟草上的过敏反应和在水稻上的致病性[J]. 郭晓霞,邹华松,李玉蓉,邹丽芳,陈功友. 微生物学报. 2010(09)
[10]甜瓜细菌性果斑病菌致病性突变体筛选与hrcR基因的克隆[J]. 任争光,侯磊,宋治国,张力群. 植物病理学报. 2009(05)
博士论文
[1]骆驼刺中慢生根瘤菌CCNWXJ12-2T盐胁迫转录组分析及与耐盐相关基因功能研究[D]. 柳晓东.西北农林科技大学 2016
[2]西瓜噬酸菌越冬能力及两菌群在同一寄主定殖动态差异研究[D]. 孙柏欣.沈阳农业大学 2016
[3]西瓜食酸菌（Acidovorax citrulli）Ⅲ型分泌系统抑制剂的高通量筛选[D]. 陈亮.中国农业大学 2016
本文编号：3323585
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3323585.html
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