克雷伯氏菌表达系统的构建及dhaT和yqhD基因的表达

发布时间：2021-08-05 18:21

　　1,3-丙二醇（1,3-propanediol,1.3-PD）是August Freund在巴氏梭菌发酵的甘油发酵液中发现的。它是一种重要的化工原料。聚对苯二甲酸丙酯（PTT）的工业应用使1,3-丙二醇具有很强的应用前景和巨大的商业价值。本课题通过改造pET-28a质粒,构建新的表达载体,并在Klebsiella中分别强化表达来自Klebsiella中的dhaT基因和来自E.coli中的yqhD基因所编码的1,3-丙二醇氧化还原酶,目的是为了提高从甘油到1.3-PD的转化,研究其对Klebsiella产1,3-PD的影响。为了提高微生物发酵生产1,3-丙二醇的产量,降低成本,提高微生物发酵生产1,3-丙二醇的竞争力,必须获得高产、转化率高的菌株。针对上述内容,本论文开展了以下研究工作:（1）改造了pET-28a质粒启动子,构建新的表达载体重组肺炎克雷伯菌pET-P_tac-dhaT、pET-P_tac-yqhD、pET-P_dhat-dhaT和pET-P_dhat-yqhD,用来过表达dhaT基因和yqhD... 

【文章来源】：齐鲁工业大学山东省

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

实验流程图

图 2.1 pET-Ptac-dhaT and pET-Ptac-yqhD 质粒载体的构建Fig. 2.1 Construction of pET-Ptac-dhaT and pET-Ptac-yqhD plasmid ve-Pdhat-yqhD 和 pET-Pdhat-dhaT 表达载体的构建合成的 Pdhat启动子基因为模板，用引物 Pdhat-F/Pdhat-R 196 bp 的 Pdhat启动子基因片段，采用限制性内切酶 Bgl 片段和 pET-28a 质粒进行双酶切，再用 T4 连接酶连接得别用引物 dhaT-F/dhaT-R 和 yqhD-F/yqhD-R 经过 PCR 扩dhaT 基因片段和 1164 bp 的 yqhD 基因片段，采用限制性 dhaT 基因片段、yqhD 基因片段以及 pET-Pdhat重组载体进酶连接得到 pET-Pdhat-dhaT 和 pET-Pdhat-yqhD 两个重组载因测序，测序正确后，再进行下一步实验，其构建示意图

图 2.2 pET-Pdhat-dhaT 和 pET-Pdhat-yqhD 质粒载体的构. 2.2 Construction of pET-Pdhat-dhaT and pET-Pdhat-yqhD pla段的扩增的引物扩增目的基因，利用高保真 DNA 聚合酶扩：表 2.13PCR 反应体系Table 2.13 PCR amplification reaction system反应组分 体积（anta Max Master MixPrimer IPrimer IIModelddH2O总体积333395

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：3324237