沙柳SpsLAS2、SpsLAS3基因的克
发布时间：2021-08-07 06:39
分生组织的发育会影响植物的形态建成,而植株形态会极大影响园林植物的群落配置与景观效果。为促进沙柳（Salixpsammophila）的分子定向育种,研究其基因调控机理,本研究利用同源克隆技术克隆获得沙柳SpsLAS2、SpsLAS3基因并做生物信息学及组织特异性表达分析,构建35s::SpsLAS2与35s::SpsLAS3超量表达载体。通过Sitefinding-PCR技术克隆SpsLAS2基因的5’调控区序列片段并做序列分析。具体研究结果如下:1.通过同源克隆技术获得沙柳SpLAS2与SpsLAS3基因的CDS序列,研究发现SpsLAS2和SpsLAS3基因序列相似性达96.69%,氨基酸序列相似性达97.6%。SpsLAS2和SpsLAS3基因ORF长分别为1248、1254 bp,分别编码415和417个氨基酸残基。其氨基酸序列具有 GRS（GIBBERELLIN-INSENSITIVE,REPRESSOR of ga1-3,SCARECROW）基因家族典型的五个结构域[1],属LS亚家族。2.同源蛋白序列比对与系统进化树构建表明,沙柳SpsLAS2、SpsLAS3蛋白序列与欧...
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１?ＧＡＲＳ蛋白分子结构［６２］??６
Ｂｏｌｌｅ［６６］等对模式植物拟南芥和水稻的基因家族进行进化分析，将Ｇ兄４５??基因家族划分为８个亚家族：Ｌ／ＳＣＸ、別７７、ＳＣｉ３、Ｚ）￡ＸＺ＾、Ｓｄ?＊Ｓ７／ｉ？、ｉ＾和／ＭＭ??（如图２）。他＾＾［６７］等通过进化树分析将０反八３基因家族分为１３个亚家族乂＿７７、??ＡｔＳＣＬ４／７、ＡｔＳＣＬ９、ＡｔＳＨＲ、ＨＡＭ、ＡｔＬＡＳ、ＡｔＳＣＲ、Ａ－ｔＳＣＬ３、ＡｔＳＣＬ２８、ＤＥＬＬＡ、??尸ｄ?ＯＭ和付。其研究结果表明不同植物中基因家族序列存在高度相??似性，这表明该家族在植物中可能是通过串联复制产生重复基因而进行进化的。由??于序列高度保守，同一亚家族成员在功能上也具有相似性或相关性。??—ｒ？纖＂ｄｉｍ念｛５】於??一―—二…?，＾?１?■歲?Ａｔ?????????????．．．．．．－ｐ：：＝ｚ：ｒｒ：??ｒ－———?＆￣ｃｒｒｚ?ｉｔ?ＳＳ??＇?｛?４??ｉ＊獅哪料．：ｐ雄．＊貧??一卿—一？ｎ￡＾ｃｒ＝??ｒ———————屬｜￡??＇１．…—Ｉ?＾?ｊｒＵＩ－－ｃｚｚｚ??ｌ￣ｎ?ｒ??ｔｍ??ｉ＾ｃｚｒ：念雜??Ｍｇ＾ｊＬＪｋ?緣?Ｉ?ｌ…．．－???…＇『一一＜？麵务??－?１?．“、＞？、—??Ｌ．．．．，，，，．．．，．，＾ＷＯａ－＾??－．一一一．．．???一ｒ°—？？＂？＊＊＊?？〇？＃???—?？＾Ｐ１＇??ｆ＿＿纖＾＾娘??ｘｍｕｕ＾一????＾，ｒ－＾Ｃ：?－：：？：?ＳＳ??瞻?Ｌ??ｉ?「￣？Ｍ＝ｎＳｓｉ??—?＊?￣７＝＝ｍ
采用?Ｔｈｅｒｍｏ?Ｆｉｓｈｅｒ?公司生产的?ＧｅｎｅＪＥＴ?Ｐｌａｎｔ?ＲＮＡ?Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ?Ｋｉｔ?试剂盒进行??沙柳总ＲＮＡ的提取。采用紫外分光光度计进行浓度检测，浓度为２７７８?ｎｇ／ｐｌ电泳结??果显示２８?ｓ条带亮度约是１８?ｓ处的两倍（如图３），说明ＲＮＡ提取质量较好。??１??２８ｓ—ｉ，??１８ｓ—??—??图３沙柳总ＲＮＡ电泳图??Ｆｉｇ．３?Ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｏｇｒａｍ?ｏｆ?Ｓａｌｉｘ?ｐｓａｍｍｏｐｈｉｌａ??３．?１．２设计及测试引物结果??提取沙柳全株ＲＮＡ并进行ｃＤＮＡ第一链的合成，以ｃＤＮＡ第一链为模板，利??用所设计的５’端ＵＴＲ区引物与３＇端ＵＴＲ区引物，在２０?｜ｉｌ?Ｐｆｕ高保真酶体系下进行??ＰＣＲ的扩增，得到目标条带，利用Ｔｒａｎｓ２Ｋ?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ进行长度判断，目标条带??为预估约为１５００?ｂｐ左右，实际亮度条带在１０００?ｂｐ与２０００?ｂｐ之间，约为１５００?ｂｐ??符合预估条件（如图４）。??Ｍ?１??２?ｏｏｏｂ?ｐ??滅＿??图４目标基因扩增电泳检测??Ｆｉｇ．?４?Ｅｌｅｃｔｒｏｆｈｏｒｅｓｉｓ?ｐａｔｔｅｒｎ?ｏｆ?ｔａｒｇｅｔ?ｇｅｎｅ??
【参考文献】：
期刊论文
[1]兴安落叶松UDP焦磷酸化酶基因启动子的克隆及双元载体的构建[J]. 梅丽丽,郭鑫,张尧,林晓飞,张文波. 分子植物育种. 2018(22)
[2]沙柳SpsLAS基因超表达对拟南芥营养生长的影响[J]. 张磊,路东晔,张国盛,杨海峰. 西北植物学报. 2018(02)
[3]植物TCP转录因子的作用机理及其应用研究进展[J]. 冯志娟,徐盛春,刘娜,张古文,胡齐赞,龚亚明. 植物遗传资源学报. 2018(01)
[4]北沙柳种质资源居群表型多样性[J]. 郝蕾,张国盛,穆喜云,韩胜利,王颖,宁瑞些,白玉荣,张磊. 西北植物学报. 2017(05)
[5]沙柳SpsLAZY1a和SpsLAZY1b基因克隆及生物信息学分析[J]. 张磊,叶志玮,赵晨曦,张国盛,杨海峰. 西北林学院学报. 2017(01)
[6]沙柳PNY基因克隆、生物信息学及组织特异性表达[J]. 杨海峰,王文娟,刘乐,卜松雪,张雅喃,何丽君. 东北林业大学学报. 2017(01)
[7]沙柳SpsLAS基因克隆及生物信息学分析[J]. 路东晔,贺玉娇,金娜,刘乐,卜松雪,王雷,杨海峰. 分子植物育种. 2017(02)
[8]沙柳组培技术初探[J]. 敖敦,杨海峰,王雷,马月林. 福建林业科技. 2016(01)
[9]毛乌素沙地人工沙柳（Salix psammophila）林平茬复壮技术[J]. 海龙,王晓江,张文军,张雷,洪光宇,李卓凡. 中国沙漠. 2016(01)
[10]Cd胁迫对水稻生长及内源激素含量的影响[J]. 游来勇,王昌全,罗娟,李冰,曾建. 生态环境学报. 2015(05)
博士论文
[1]簸箕柳基因组测序及功能基因研究[D]. 戴晓港.南京林业大学 2017
[2]杨柳分化及其性别决定的基因组学基础[D]. 侯静.南京林业大学 2016
[3]烟草腋芽发育相关基因的克隆与功能分析[D]. 陈雅琼.中国农业科学院 2015
[4]杨树miRNA基因家族进化与靶基因研究[D]. 刘志祥.中南林业科技大学 2013
[5]杨柳木材纤维增强沙柳材中密度纤维板基础理论与关键技术研究[D]. 李奇.内蒙古农业大学 2012
[6]沙柳沙障腐蚀过程及防腐抗蚀效果研究[D]. 龚萍.内蒙古农业大学 2012
[7]北沙柳种质资源的多样性分析与优良无性系筛选[D]. 张玮.内蒙古农业大学 2011
[8]甘蓝型油菜GRAS家族基因BnLAS的分离和功能分析[D]. 杨明贵.华中农业大学 2010
[9]库布齐沙漠沙柳培育关键技术研究[D]. 米志英.内蒙古农业大学 2008
硕士论文
[1]沙柳SpsFUCT基因的克隆、组织特异性表达及表达载体构建[D]. 杨杨.内蒙古农业大学 2018
[2]沙柳SpsLAS基因克隆、组织特异性表达及表达载体构建[D]. 路东晔.内蒙古农业大学 2017
[3]不同平茬高度对沙柳生长状况的影响研究[D]. 马天琴.内蒙古农业大学 2017
[4]8种柳属植物微体快繁关键技术的研究[D]. 崔敏.中国林业科学研究院 2017
[5]沙柳TAC1基因克隆与生物信息学及组织表达特性分析[D]. 马月林.内蒙古农业大学 2016
[6]两种芋兰分枝发育相关基因LS及其调控区的克隆与表达分析[D]. 陈秀珍.广州中医药大学 2016
[7]沙柳基活性炭对水体中染料和酚类物质的吸附研究[D]. 刘静萱.郑州大学 2016
[8]沙柳组培快繁和再生体系建立的初步研究[D]. 敖敦.内蒙古农业大学 2015
[9]不同生境对园林植物构型的影响[D]. 陈梦依.福建农林大学 2015
[10]AtNAC1转录因子的分子建模和铁皮石斛NAC家族基因的克隆及表达分析[D]. 朱乾坤.西南交通大学 2014
本文编号：3327282
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１?ＧＡＲＳ蛋白分子结构［６２］??６
Ｂｏｌｌｅ［６６］等对模式植物拟南芥和水稻的基因家族进行进化分析，将Ｇ兄４５??基因家族划分为８个亚家族：Ｌ／ＳＣＸ、別７７、ＳＣｉ３、Ｚ）￡ＸＺ＾、Ｓｄ?＊Ｓ７／ｉ？、ｉ＾和／ＭＭ??（如图２）。他＾＾［６７］等通过进化树分析将０反八３基因家族分为１３个亚家族乂＿７７、??ＡｔＳＣＬ４／７、ＡｔＳＣＬ９、ＡｔＳＨＲ、ＨＡＭ、ＡｔＬＡＳ、ＡｔＳＣＲ、Ａ－ｔＳＣＬ３、ＡｔＳＣＬ２８、ＤＥＬＬＡ、??尸ｄ?ＯＭ和付。其研究结果表明不同植物中基因家族序列存在高度相??似性，这表明该家族在植物中可能是通过串联复制产生重复基因而进行进化的。由??于序列高度保守，同一亚家族成员在功能上也具有相似性或相关性。??—ｒ？纖＂ｄｉｍ念｛５】於??一―—二…?，＾?１?■歲?Ａｔ?????????????．．．．．．－ｐ：：＝ｚ：ｒｒ：??ｒ－———?＆￣ｃｒｒｚ?ｉｔ?ＳＳ??＇?｛?４??ｉ＊獅哪料．：ｐ雄．＊貧??一卿—一？ｎ￡＾ｃｒ＝??ｒ———————屬｜￡??＇１．…—Ｉ?＾?ｊｒＵＩ－－ｃｚｚｚ??ｌ￣ｎ?ｒ??ｔｍ??ｉ＾ｃｚｒ：念雜??Ｍｇ＾ｊＬＪｋ?緣?Ｉ?ｌ…．．－???…＇『一一＜？麵务??－?１?．“、＞？、—??Ｌ．．．．，，，，．．．，．，＾ＷＯａ－＾??－．一一一．．．???一ｒ°—？？＂？＊＊＊?？〇？＃???—?？＾Ｐ１＇??ｆ＿＿纖＾＾娘??ｘｍｕｕ＾一????＾，ｒ－＾Ｃ：?－：：？：?ＳＳ??瞻?Ｌ??ｉ?「￣？Ｍ＝ｎＳｓｉ??—?＊?￣７＝＝ｍ
采用?Ｔｈｅｒｍｏ?Ｆｉｓｈｅｒ?公司生产的?ＧｅｎｅＪＥＴ?Ｐｌａｎｔ?ＲＮＡ?Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ?Ｋｉｔ?试剂盒进行??沙柳总ＲＮＡ的提取。采用紫外分光光度计进行浓度检测，浓度为２７７８?ｎｇ／ｐｌ电泳结??果显示２８?ｓ条带亮度约是１８?ｓ处的两倍（如图３），说明ＲＮＡ提取质量较好。??１??２８ｓ—ｉ，??１８ｓ—??—??图３沙柳总ＲＮＡ电泳图??Ｆｉｇ．３?Ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｏｇｒａｍ?ｏｆ?Ｓａｌｉｘ?ｐｓａｍｍｏｐｈｉｌａ??３．?１．２设计及测试引物结果??提取沙柳全株ＲＮＡ并进行ｃＤＮＡ第一链的合成，以ｃＤＮＡ第一链为模板，利??用所设计的５’端ＵＴＲ区引物与３＇端ＵＴＲ区引物，在２０?｜ｉｌ?Ｐｆｕ高保真酶体系下进行??ＰＣＲ的扩增，得到目标条带，利用Ｔｒａｎｓ２Ｋ?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ进行长度判断，目标条带??为预估约为１５００?ｂｐ左右，实际亮度条带在１０００?ｂｐ与２０００?ｂｐ之间，约为１５００?ｂｐ??符合预估条件（如图４）。??Ｍ?１??２?ｏｏｏｂ?ｐ??滅＿??图４目标基因扩增电泳检测??Ｆｉｇ．?４?Ｅｌｅｃｔｒｏｆｈｏｒｅｓｉｓ?ｐａｔｔｅｒｎ?ｏｆ?ｔａｒｇｅｔ?ｇｅｎｅ??
【参考文献】：
期刊论文
[1]兴安落叶松UDP焦磷酸化酶基因启动子的克隆及双元载体的构建[J]. 梅丽丽,郭鑫,张尧,林晓飞,张文波. 分子植物育种. 2018(22)
[2]沙柳SpsLAS基因超表达对拟南芥营养生长的影响[J]. 张磊,路东晔,张国盛,杨海峰. 西北植物学报. 2018(02)
[3]植物TCP转录因子的作用机理及其应用研究进展[J]. 冯志娟,徐盛春,刘娜,张古文,胡齐赞,龚亚明. 植物遗传资源学报. 2018(01)
[4]北沙柳种质资源居群表型多样性[J]. 郝蕾,张国盛,穆喜云,韩胜利,王颖,宁瑞些,白玉荣,张磊. 西北植物学报. 2017(05)
[5]沙柳SpsLAZY1a和SpsLAZY1b基因克隆及生物信息学分析[J]. 张磊,叶志玮,赵晨曦,张国盛,杨海峰. 西北林学院学报. 2017(01)
[6]沙柳PNY基因克隆、生物信息学及组织特异性表达[J]. 杨海峰,王文娟,刘乐,卜松雪,张雅喃,何丽君. 东北林业大学学报. 2017(01)
[7]沙柳SpsLAS基因克隆及生物信息学分析[J]. 路东晔,贺玉娇,金娜,刘乐,卜松雪,王雷,杨海峰. 分子植物育种. 2017(02)
[8]沙柳组培技术初探[J]. 敖敦,杨海峰,王雷,马月林. 福建林业科技. 2016(01)
[9]毛乌素沙地人工沙柳（Salix psammophila）林平茬复壮技术[J]. 海龙,王晓江,张文军,张雷,洪光宇,李卓凡. 中国沙漠. 2016(01)
[10]Cd胁迫对水稻生长及内源激素含量的影响[J]. 游来勇,王昌全,罗娟,李冰,曾建. 生态环境学报. 2015(05)
博士论文
[1]簸箕柳基因组测序及功能基因研究[D]. 戴晓港.南京林业大学 2017
[2]杨柳分化及其性别决定的基因组学基础[D]. 侯静.南京林业大学 2016
[3]烟草腋芽发育相关基因的克隆与功能分析[D]. 陈雅琼.中国农业科学院 2015
[4]杨树miRNA基因家族进化与靶基因研究[D]. 刘志祥.中南林业科技大学 2013
[5]杨柳木材纤维增强沙柳材中密度纤维板基础理论与关键技术研究[D]. 李奇.内蒙古农业大学 2012
[6]沙柳沙障腐蚀过程及防腐抗蚀效果研究[D]. 龚萍.内蒙古农业大学 2012
[7]北沙柳种质资源的多样性分析与优良无性系筛选[D]. 张玮.内蒙古农业大学 2011
[8]甘蓝型油菜GRAS家族基因BnLAS的分离和功能分析[D]. 杨明贵.华中农业大学 2010
[9]库布齐沙漠沙柳培育关键技术研究[D]. 米志英.内蒙古农业大学 2008
硕士论文
[1]沙柳SpsFUCT基因的克隆、组织特异性表达及表达载体构建[D]. 杨杨.内蒙古农业大学 2018
[2]沙柳SpsLAS基因克隆、组织特异性表达及表达载体构建[D]. 路东晔.内蒙古农业大学 2017
[3]不同平茬高度对沙柳生长状况的影响研究[D]. 马天琴.内蒙古农业大学 2017
[4]8种柳属植物微体快繁关键技术的研究[D]. 崔敏.中国林业科学研究院 2017
[5]沙柳TAC1基因克隆与生物信息学及组织表达特性分析[D]. 马月林.内蒙古农业大学 2016
[6]两种芋兰分枝发育相关基因LS及其调控区的克隆与表达分析[D]. 陈秀珍.广州中医药大学 2016
[7]沙柳基活性炭对水体中染料和酚类物质的吸附研究[D]. 刘静萱.郑州大学 2016
[8]沙柳组培快繁和再生体系建立的初步研究[D]. 敖敦.内蒙古农业大学 2015
[9]不同生境对园林植物构型的影响[D]. 陈梦依.福建农林大学 2015
[10]AtNAC1转录因子的分子建模和铁皮石斛NAC家族基因的克隆及表达分析[D]. 朱乾坤.西南交通大学 2014
本文编号：3327282
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