Botryosphaeria dothidea侵染后山核桃酚类物质合成相关酶活及关键基因的表达特性
发布时间：2021-08-07 07:40
茶藨子葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea）是引起山核桃干腐病的病原菌,易侵染枝干部位,造成全株死亡,导致严重经济损失。抗病品种的培育过程中发现分别以湖南山核桃和美国山核桃为砧木、浙江山核桃为接穗的嫁接苗抗性好、产果率高,目前已广泛种植,但关于其抗病机理还缺乏研究。前期研究发现发病严重的山核桃体内酚类物质以及相关酶——苯丙氨酸解氨酶（Phenylalanine ammonia-lyase,PAL）、过氧化物酶（Peroxidase,POD）和多酚氧化酶（Polyphenol oxidase,PPO）都比抗病山核桃品种中含量低,这些指标对抗病性的鉴定起重要作用,因此还需要对山核桃受B.dothidea侵染后抗性反应中酚类物质的合成开展进一步的研究。本研究以湖南嫁接山核桃（HG）、美国嫁接山核桃（AG）和浙江山核桃（ZJ）为材料,对接种B.dothidea后不同品种山核桃的感病情况和侵染状况做分析;测定了不同品种中总酚、总黄酮的含量,并对与防御相关的酶活（PAL、PPO、POD、肉桂醇脱氢酶（Cinnamyl alcohol dehydrogenase,CAD）、细胞...
【文章来源】：浙江农林大学浙江省
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
AG山核桃.1山核桃总桃；4-6：HGRNA电泳图
合测江山对分4.2.2因序测序结果，利山核桃的PA分析，序列长2.2山核桃P以3个品种序列，长度均利用DNAML全基因序长度和结构MFigMAL基因序种山核桃的均为2160bpMAN将序列序列。分别构同PAL其图4.2Figure4.2PM:DL2000DN图4.3山核gure4.3PCRM:DL2000DN序列分析的cDNA为模p，都包含37列拼接得到别命名为AG他分离物一山核桃PALCRproductoNAMarker;1桃PAL-RAproductofPANAMarker;1模板，将扩1个2160b美国嫁接山-PAL、HG一致。基因PCR产ofPALgene1,2:AG;3,4:HACE基因PCPAL-RACEge1,2:AG;3,4:H扩增的序列拼bp的开放阅山核桃、湖南-PAL和Z产物inpecanHG;5,6:ZJR产物eneinpecanHG;5,6:ZJ拼接得到3阅读框(ORF南嫁接山核J-PAL，序段完整的F)，可编码核桃和浙序列经比PAL基码720个
394.2.2.3山核桃PAL基因的系统进化分析将本实验获得的3段PAL基因序列与其他植物的PAL基因进行多重序列比对，构建系统进化树，如图4.4显示，三个品种的山核桃的PAL基因序列聚在一起，其中ZJ-PAL和AG-PAL的同源性较高，山核桃的PAL基因与胡桃科的核桃聚为一支，另外胡桃科与壳斗科的栓皮栎、加州白栎、板栗的同源性较近。桃树和杏树为一支，盐肤木和阿月浑子均为漆树科聚一支，杨柳科杨属同源性较近聚为同一支。其余则为草本植物芍药和藤本的葡萄为一个分支，它们与山核桃的同源关系较远。可见不同物种间PAL基因的同源性有所差异，为同一科的植物聚为一支，木本植物与草本植物之间同源性有所差异。图4.4山核桃PAL基因的系统发育分析Figure4.4PhylogeneticanalysisofthePALgeneinpecans4.2.3肉桂酸-4-羟基化酶(C4H)基因的克隆和分析4.2.3.1山核桃C4H基因的克隆以AG、HG和ZJ山核桃的树皮结构为cDNA模板，根据设计的特异性引物扩增出PCR片段，得到3段C4H基因片段，分别命名为AG-C4H、HG-C4H和ZJ-C4H，条带如图4.5所示，3’RACE和5’RACE扩增片段的电泳检测结果如图4.6所示。结合测序结果，利用DNAMAN将序列拼接，通过BLAST序列在线比对，3个品种山核桃的序列长度和结构同该基因的其他分离物一致。
【参考文献】：
期刊论文
[1]桉树PAL基因克隆及焦枯病菌诱导下的表达分析[J]. 叶小真,杨婕,冯丽贞,江仲鹏,陆芝,刘雨菁,李丽红,陈全助. 林业科学研究. 2019(06)
[2]植物诱导抗病及机制的研究进展[J]. 李张,潘晓华,魏赛金. 生物灾害科学. 2019(01)
[3]嫁接陆地棉查尔酮合成酶与查尔酮异构基因的克隆及表达分析[J]. 宋成攀,夏松波,王孝刚,张教海,秦鸿德,张友昌,冯常辉,别墅. 湖北农业科学. 2017(23)
[4]山核桃干腐病研究进展[J]. 刘锦,于炜. 浙江林业科技. 2017(06)
[5]推进生态化经营 助力山核桃产业可持续发展[J]. 周军. 浙江林业. 2017(04)
[6]植保素及其在增强作物抗性中的作用[J]. 陈东菊,安敏敏,李丽兰,方继朝,刘永锋,罗玉明,杨立明. 分子植物育种. 2017(02)
[7]山核桃属种间嫁接亲和性分析[J]. 唐艺荃,王红红,胡渊渊,孙志超,徐沁怡,黄坚钦,王正加. 果树学报. 2017(05)
[8]香豆素合成途径关键酶基因Ghpal、Ghc4h和Gh4cl在棉花抗链格孢菌中的作用[J]. 张珊珊,翟伟卜,郭慧敏,张文蔚,简桂良,齐放军. 植物病理学报. 2017(02)
[9]不同抗性水平水稻品种对纹枯病菌毒素的防卫反应与生理差异[J]. 左示敏,陈夕军,陈红旗,徐艳,张家豪,陈羽,陈宗祥,童蕴慧,徐敬友,潘学彪. 中国水稻科学. 2014(05)
[10]桑树肉桂酸-4-羟化酶基因（MmC4H）的克隆及在不同桑品种间的表达差异[J]. 黄满芬,王恒,方荣俊,赵卫国,张林,潘刚,刘利. 蚕业科学. 2014(04)
硕士论文
[1]嫁接山核桃抗干腐病生化机理研究[D]. 王卢燕.浙江农林大学 2018
[2]山核桃干腐病的生物学特性与控制研究[D]. 傅锦婷.浙江农林大学 2014
[3]山核桃干腐病病原菌的鉴定及其系统发育分析[D]. 王璇.浙江农林大学 2013
[4]河南省杨树溃疡病病原菌鉴定及生物学特性研究[D]. 崔晓琦.河南科技大学 2012
[5]橄榄叶黄酮合成相关基因cDNA的克隆[D]. 王云梅.福建农林大学 2009
[6]山核桃抗溃疡病机理及其相关因素的研究[D]. 郑宏兵.安徽农业大学 2004
本文编号：3327374
【文章来源】：浙江农林大学浙江省
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
AG山核桃.1山核桃总桃；4-6：HGRNA电泳图
合测江山对分4.2.2因序测序结果，利山核桃的PA分析，序列长2.2山核桃P以3个品种序列，长度均利用DNAML全基因序长度和结构MFigMAL基因序种山核桃的均为2160bpMAN将序列序列。分别构同PAL其图4.2Figure4.2PM:DL2000DN图4.3山核gure4.3PCRM:DL2000DN序列分析的cDNA为模p，都包含37列拼接得到别命名为AG他分离物一山核桃PALCRproductoNAMarker;1桃PAL-RAproductofPANAMarker;1模板，将扩1个2160b美国嫁接山-PAL、HG一致。基因PCR产ofPALgene1,2:AG;3,4:HACE基因PCPAL-RACEge1,2:AG;3,4:H扩增的序列拼bp的开放阅山核桃、湖南-PAL和Z产物inpecanHG;5,6:ZJR产物eneinpecanHG;5,6:ZJ拼接得到3阅读框(ORF南嫁接山核J-PAL，序段完整的F)，可编码核桃和浙序列经比PAL基码720个
394.2.2.3山核桃PAL基因的系统进化分析将本实验获得的3段PAL基因序列与其他植物的PAL基因进行多重序列比对，构建系统进化树，如图4.4显示，三个品种的山核桃的PAL基因序列聚在一起，其中ZJ-PAL和AG-PAL的同源性较高，山核桃的PAL基因与胡桃科的核桃聚为一支，另外胡桃科与壳斗科的栓皮栎、加州白栎、板栗的同源性较近。桃树和杏树为一支，盐肤木和阿月浑子均为漆树科聚一支，杨柳科杨属同源性较近聚为同一支。其余则为草本植物芍药和藤本的葡萄为一个分支，它们与山核桃的同源关系较远。可见不同物种间PAL基因的同源性有所差异，为同一科的植物聚为一支，木本植物与草本植物之间同源性有所差异。图4.4山核桃PAL基因的系统发育分析Figure4.4PhylogeneticanalysisofthePALgeneinpecans4.2.3肉桂酸-4-羟基化酶(C4H)基因的克隆和分析4.2.3.1山核桃C4H基因的克隆以AG、HG和ZJ山核桃的树皮结构为cDNA模板，根据设计的特异性引物扩增出PCR片段，得到3段C4H基因片段，分别命名为AG-C4H、HG-C4H和ZJ-C4H，条带如图4.5所示，3’RACE和5’RACE扩增片段的电泳检测结果如图4.6所示。结合测序结果，利用DNAMAN将序列拼接，通过BLAST序列在线比对，3个品种山核桃的序列长度和结构同该基因的其他分离物一致。
【参考文献】：
期刊论文
[1]桉树PAL基因克隆及焦枯病菌诱导下的表达分析[J]. 叶小真,杨婕,冯丽贞,江仲鹏,陆芝,刘雨菁,李丽红,陈全助. 林业科学研究. 2019(06)
[2]植物诱导抗病及机制的研究进展[J]. 李张,潘晓华,魏赛金. 生物灾害科学. 2019(01)
[3]嫁接陆地棉查尔酮合成酶与查尔酮异构基因的克隆及表达分析[J]. 宋成攀,夏松波,王孝刚,张教海,秦鸿德,张友昌,冯常辉,别墅. 湖北农业科学. 2017(23)
[4]山核桃干腐病研究进展[J]. 刘锦,于炜. 浙江林业科技. 2017(06)
[5]推进生态化经营 助力山核桃产业可持续发展[J]. 周军. 浙江林业. 2017(04)
[6]植保素及其在增强作物抗性中的作用[J]. 陈东菊,安敏敏,李丽兰,方继朝,刘永锋,罗玉明,杨立明. 分子植物育种. 2017(02)
[7]山核桃属种间嫁接亲和性分析[J]. 唐艺荃,王红红,胡渊渊,孙志超,徐沁怡,黄坚钦,王正加. 果树学报. 2017(05)
[8]香豆素合成途径关键酶基因Ghpal、Ghc4h和Gh4cl在棉花抗链格孢菌中的作用[J]. 张珊珊,翟伟卜,郭慧敏,张文蔚,简桂良,齐放军. 植物病理学报. 2017(02)
[9]不同抗性水平水稻品种对纹枯病菌毒素的防卫反应与生理差异[J]. 左示敏,陈夕军,陈红旗,徐艳,张家豪,陈羽,陈宗祥,童蕴慧,徐敬友,潘学彪. 中国水稻科学. 2014(05)
[10]桑树肉桂酸-4-羟化酶基因（MmC4H）的克隆及在不同桑品种间的表达差异[J]. 黄满芬,王恒,方荣俊,赵卫国,张林,潘刚,刘利. 蚕业科学. 2014(04)
硕士论文
[1]嫁接山核桃抗干腐病生化机理研究[D]. 王卢燕.浙江农林大学 2018
[2]山核桃干腐病的生物学特性与控制研究[D]. 傅锦婷.浙江农林大学 2014
[3]山核桃干腐病病原菌的鉴定及其系统发育分析[D]. 王璇.浙江农林大学 2013
[4]河南省杨树溃疡病病原菌鉴定及生物学特性研究[D]. 崔晓琦.河南科技大学 2012
[5]橄榄叶黄酮合成相关基因cDNA的克隆[D]. 王云梅.福建农林大学 2009
[6]山核桃抗溃疡病机理及其相关因素的研究[D]. 郑宏兵.安徽农业大学 2004
本文编号：3327374
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3327374.html
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