过表达miR-101-3p可下调TOP2A基因表达抑制膀胱癌细胞的增殖和迁移
发布时间：2021-08-07 15:30
目的发现并确认膀胱癌致癌基因TOP2A的上游miRNA,并探讨其在膀胱癌中发挥的具体作用及可能机制。方法starBase数据库用于预测膀胱癌中潜在和TOP2A结合的miRNAs,并运用TCGA数据库挖掘对所有预测的miRNAs与靶基因的相关性和生存分析进行排序;根据预测的结合位点情况构建双荧光素酶报告基因实验和干扰实验,以确认候选基因miR-101-3p和TOP2A基因的结合情况;qRT-PCR用于分析两基因在临床组织水平表达相关性;运用细胞转染技术在膀胱癌细胞中分别转染miR-101-3p mimics和inhibitor及各自的阴性对照,随后采用CCK8,细胞划痕愈合实验和Transwell实验测定细胞的增殖及迁移能力变化情况;细胞共转染技术和细胞功能回复实验以明确miR-101-3p/TOP2A信号轴在肿瘤细胞恶性表型中的调控作用。结果 starBase数据库预测获得147个miRNAs;TCGA数据库分析显示,miR-101-3p和TOP2A基因相关系数最高,且与膀胱癌患者不良预后密相关,作为后续实验候选基因;双荧光素酶报告基因实验和干扰实验证实两者在膀胱癌中的结合能力,miR...
【文章来源】：现代泌尿外科杂志. 2020,25(08)
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
TOP2A的调控基因miR-101-3p与膀胱癌预后的相关性
根据预测结果，我们发现在TOP2A的3′UTR区域存在和miR-101-3p结合的位点（图2A）；据此，我们设计了荧光素酶报告基因实验，通过构建TOP2A基因的野生型和突变型基因，并同时导入含有荧光素酶活性的miR-101-3p mimics类似物进入膀胱癌细胞系T24中，随后测定荧光素酶的活性以判断两者的结合关系，发现野生型中荧光素酶活性减退，而突变型中未见明显变化，这说明两者在预测区域存在结合关系（图2B）；同时，我们设计的干扰实验更进一步说明两者表达的相关性，在膀胱癌细胞系中分别转染mimics NC和miR-101-3p mimics，并测定TOP2A基因的表达情况，发现miR-101-3p mimics组细胞中的TOP2A基因表达下调（图2C）；随后，我们测定临床组织标本中miR-101-3p的表达数据并和TOP2A进行Pearson相关性分析，结果发现在膀胱癌中miR-101-3p表达下调，同时两者的表达水平具有负相关的关系（图2D、E）；这说明在膀胱癌中，miR-101-3p能够直接结合靶基因TOP2A且负调控靶基因的表达。2.3 上调miR-101-3p表达能够抑制膀胱癌的增殖和迁移能力
我们为了确认在膀胱癌中miR-101-3p/TOP2A信号轴对膀胱癌细胞生物学功能的影响，设计了功能回复实验。我们运用细胞共转染技术，在膀胱癌细胞系中分别转染miR-101-3p NC、miR-101-3p mimics和miR-101-3p mimics+pcDNA3.0TOP2A，并运用CCK-8实验测定结果发现上调TOP2A基因表达后，可以恢复肿瘤细胞的增殖能力（图4A）；运用划痕愈合实验测定结果发现上调TOP2A基因表达，肿瘤细胞的迁移能力受限制情况变弱（图4B）；运用Transwell实验测定结果发现上调miR-101-3p表达后，肿瘤细胞的侵袭能力出现部分恢复（图4C）。综上，miR-101-3p在膀胱癌细胞中是通过下调TOP2A基因的表达发挥抑制肿瘤恶性进展的作用。图4 高表达TOP2A可以恢复膀胱癌细胞的增殖和迁移能力
本文编号：3328056
【文章来源】：现代泌尿外科杂志. 2020,25(08)
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
TOP2A的调控基因miR-101-3p与膀胱癌预后的相关性
根据预测结果，我们发现在TOP2A的3′UTR区域存在和miR-101-3p结合的位点（图2A）；据此，我们设计了荧光素酶报告基因实验，通过构建TOP2A基因的野生型和突变型基因，并同时导入含有荧光素酶活性的miR-101-3p mimics类似物进入膀胱癌细胞系T24中，随后测定荧光素酶的活性以判断两者的结合关系，发现野生型中荧光素酶活性减退，而突变型中未见明显变化，这说明两者在预测区域存在结合关系（图2B）；同时，我们设计的干扰实验更进一步说明两者表达的相关性，在膀胱癌细胞系中分别转染mimics NC和miR-101-3p mimics，并测定TOP2A基因的表达情况，发现miR-101-3p mimics组细胞中的TOP2A基因表达下调（图2C）；随后，我们测定临床组织标本中miR-101-3p的表达数据并和TOP2A进行Pearson相关性分析，结果发现在膀胱癌中miR-101-3p表达下调，同时两者的表达水平具有负相关的关系（图2D、E）；这说明在膀胱癌中，miR-101-3p能够直接结合靶基因TOP2A且负调控靶基因的表达。2.3 上调miR-101-3p表达能够抑制膀胱癌的增殖和迁移能力
我们为了确认在膀胱癌中miR-101-3p/TOP2A信号轴对膀胱癌细胞生物学功能的影响，设计了功能回复实验。我们运用细胞共转染技术，在膀胱癌细胞系中分别转染miR-101-3p NC、miR-101-3p mimics和miR-101-3p mimics+pcDNA3.0TOP2A，并运用CCK-8实验测定结果发现上调TOP2A基因表达后，可以恢复肿瘤细胞的增殖能力（图4A）；运用划痕愈合实验测定结果发现上调TOP2A基因表达，肿瘤细胞的迁移能力受限制情况变弱（图4B）；运用Transwell实验测定结果发现上调miR-101-3p表达后，肿瘤细胞的侵袭能力出现部分恢复（图4C）。综上，miR-101-3p在膀胱癌细胞中是通过下调TOP2A基因的表达发挥抑制肿瘤恶性进展的作用。图4 高表达TOP2A可以恢复膀胱癌细胞的增殖和迁移能力
本文编号：3328056
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