TEDC2基因对肺腺癌预后和放射敏感性的影响及其机制研究
发布时间：2021-08-07 17:20
目的:肺癌是在世界范围内被普遍诊断的癌症,肺癌相关的死亡率和发病率在中国每年都在上升[1]。尽管目前除了手术、放化疗等常规的治疗手段,对于肺腺癌已经应用分子诊断和靶向药物等综合治疗手段,肺腺癌患者预后仍然很差,五年生存率仅约为15%[2]。目前虽有一些能够预测肺腺癌预后的标志物,然而由于生物的多样性及个体的差异,相同病理分型的患者仍可能拥有不同的预后,影响肺腺癌预后的机制仍有很多空间亟待探索。影响肺腺癌预后的因素和生物标志物一直是肺癌研究的主要方向之一。揭示影响肺腺癌预后的标志物不仅能帮我们更好的预测患者的生存率,还能为肺腺癌的精准治疗及个体化治疗提供新思路、新方向。放射治疗在肺腺癌的治疗中起着关键的作用,是肺腺癌标准治疗的一部分,早期或寡转移性病变可用立体定向放射治疗,局部晚期III期肺腺癌将接受胸部局部放疗和全身化疗[3]。放射敏感性是影响肺腺癌放射治疗疗效的主要原因之一。肿瘤对放射治疗的抵抗是一种常见现象,其机制尚不完全清楚。同时在治疗中受限于对正常组织的保护,不能过多的提高放射剂量。如何克服肿瘤的放射抗性,提高放射敏感性,最大限度的杀伤肿瘤细胞,是目前放射治疗的一个主要研究方向...
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：118 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
2.2.1分离胶配比
中国医科大学博士学位论文8图2.6.2.2.2浓缩胶配比②上样和电泳：确定SDS-PAGE凝胶固后将其置于电泳槽中，加电泳液，拔梳子，两侧泳道中各加入5μL蛋白marker标记，其余泳道20μL左右蛋白样品，采用恒压电泳，80V跑浓缩胶，蛋白进入分离胶后调整至120V恒压电泳，待目的蛋白分离或蛋白跑至分离胶底部结束电泳。③转印：配制500mL转膜液，取下凝胶，去除浓缩胶及多余胶，根据分离胶的大小裁剪合适尺寸的PVDF膜，将滤纸、胶、PVDF膜（做好标记，甲醇活化1min左右）、海绵夹浸泡于转膜液中，按“（黑－）海绵－滤纸－凝胶－PVDF膜－滤纸－海绵（红＋）”的顺序进行组装。转膜器排尽气泡，放入转移槽，倒入转膜液浸没转移夹。恒流200mA，1.5h。转膜装置放于4℃冷库，置于冰上。④免疫检测：TBST配制5%脱脂牛奶封闭PVDF膜中1h，TBST摇晃洗膜3次，5min/次。于相应一抗中4℃冰箱封闭过夜，次日将膜取出，TBST中摇洗3次，5min/次。按比例稀释二抗，将膜室温孵育于其中1h，TBST中摇洗3次，5min/次。ECL发光液1:1配制，均匀滴加于漂洗后的PVDF膜上，经发光仪显像后观察并采集图像。2.6.3免疫组化染色1)烤片：电热恒温培养箱中65℃，4-6小时2)脱蜡：依次将载玻片放入二甲苯（10min）-二甲苯（10min）-100%酒精（5min）-95%酒精（5min）-80%酒精（5min）-70%酒精（5min）3)抗原修复：脱蜡后在清水中冲洗一段时间，将载玻片放入煮沸的柠檬酸盐修复液其中（完全没入其中），煮20min，然后室温晾干（载玻片不拿出，继续放在
中国医科大学博士学位论文103结果3.1肺腺癌差异基因结果利用R软件的edgeR包对535例肺腺癌组织及59例癌旁组织样本测序数据进行分析，共筛选出癌与癌旁5589个差异基因，其中2463个上调差异基因，171个下调差异基因，通过gplots软件包根据差异基因FDR值及log2FC表达倍数绘制出火山图（图3.1.1）。TEDC2(即C16orf59)mRNA在肺腺癌组织中表达上调，按FDR值升序排列上调表达的基因top5具体结果见下表（表3.1.1）。图3.1.1差异基因火山图（log2FC>3倍，FDR<0.01，红色为显著上调，绿色为显著下调）
【参考文献】：
期刊论文
[1]中国城市癌症早诊早治项目进展[J]. 陈万青,李霓,石菊芳,任建松,陈宏达,李江,代敏,赫捷. 中国肿瘤. 2019(01)
[2]CUL4A作用机制及其与肿瘤关系的研究进展[J]. 文亦戈,易黎明,肖玲,周辉. 肿瘤药学. 2018(05)
[3]2014年中国分地区恶性肿瘤发病和死亡分析[J]. 陈万青,孙可欣,郑荣寿,张思维,曾红梅,邹小农,赫捷. 中国肿瘤. 2018(01)
本文编号：3328208
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：118 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
2.2.1分离胶配比
中国医科大学博士学位论文8图2.6.2.2.2浓缩胶配比②上样和电泳：确定SDS-PAGE凝胶固后将其置于电泳槽中，加电泳液，拔梳子，两侧泳道中各加入5μL蛋白marker标记，其余泳道20μL左右蛋白样品，采用恒压电泳，80V跑浓缩胶，蛋白进入分离胶后调整至120V恒压电泳，待目的蛋白分离或蛋白跑至分离胶底部结束电泳。③转印：配制500mL转膜液，取下凝胶，去除浓缩胶及多余胶，根据分离胶的大小裁剪合适尺寸的PVDF膜，将滤纸、胶、PVDF膜（做好标记，甲醇活化1min左右）、海绵夹浸泡于转膜液中，按“（黑－）海绵－滤纸－凝胶－PVDF膜－滤纸－海绵（红＋）”的顺序进行组装。转膜器排尽气泡，放入转移槽，倒入转膜液浸没转移夹。恒流200mA，1.5h。转膜装置放于4℃冷库，置于冰上。④免疫检测：TBST配制5%脱脂牛奶封闭PVDF膜中1h，TBST摇晃洗膜3次，5min/次。于相应一抗中4℃冰箱封闭过夜，次日将膜取出，TBST中摇洗3次，5min/次。按比例稀释二抗，将膜室温孵育于其中1h，TBST中摇洗3次，5min/次。ECL发光液1:1配制，均匀滴加于漂洗后的PVDF膜上，经发光仪显像后观察并采集图像。2.6.3免疫组化染色1)烤片：电热恒温培养箱中65℃，4-6小时2)脱蜡：依次将载玻片放入二甲苯（10min）-二甲苯（10min）-100%酒精（5min）-95%酒精（5min）-80%酒精（5min）-70%酒精（5min）3)抗原修复：脱蜡后在清水中冲洗一段时间，将载玻片放入煮沸的柠檬酸盐修复液其中（完全没入其中），煮20min，然后室温晾干（载玻片不拿出，继续放在
中国医科大学博士学位论文103结果3.1肺腺癌差异基因结果利用R软件的edgeR包对535例肺腺癌组织及59例癌旁组织样本测序数据进行分析，共筛选出癌与癌旁5589个差异基因，其中2463个上调差异基因，171个下调差异基因，通过gplots软件包根据差异基因FDR值及log2FC表达倍数绘制出火山图（图3.1.1）。TEDC2(即C16orf59)mRNA在肺腺癌组织中表达上调，按FDR值升序排列上调表达的基因top5具体结果见下表（表3.1.1）。图3.1.1差异基因火山图（log2FC>3倍，FDR<0.01，红色为显著上调，绿色为显著下调）
【参考文献】：
期刊论文
[1]中国城市癌症早诊早治项目进展[J]. 陈万青,李霓,石菊芳,任建松,陈宏达,李江,代敏,赫捷. 中国肿瘤. 2019(01)
[2]CUL4A作用机制及其与肿瘤关系的研究进展[J]. 文亦戈,易黎明,肖玲,周辉. 肿瘤药学. 2018(05)
[3]2014年中国分地区恶性肿瘤发病和死亡分析[J]. 陈万青,孙可欣,郑荣寿,张思维,曾红梅,邹小农,赫捷. 中国肿瘤. 2018(01)
本文编号：3328208
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