基于CRISPR/Cas12a高效克隆高GC大片段DNA技术的研究
发布时间：2021-08-12 14:30
天然产物（Natural Products,NPs）是药物先导化合物及临床药物的重要来源,其中微生物来源的NPs占比高达1/3。微生物药物发现在上世纪六十年代前后,经历黄金期后,最近几十年却几乎进入停滞状态,人们一度认为微生物药物资源已经枯竭。随着测序技术和生物信息学技术的发展,微生物全基因组被不断揭秘,海量暗物质样沉默基因簇（Biosynthetic Gene Cluster,BGC）被发现。这些暗物质蕴藏了大量的新颖生物活性小分子（Bioactive Small Molecules,BSMs）。通过异源表达激活沉默BGC是获得这些BSMs的主要手段。但克隆获取这些BGC大片段通常比较困难。放线菌作为微生物药物合成的主力,由于其基因组GC含量高的特性,从中直接克隆大片段DNA（≥80kb）目前依旧缺乏简单高效的方法。本研究开发了一种基于CRISPR/Cas12a的简单、快速、直接克隆大片段DNA的体外技术平台,称为CAT-FISHING（CRISPR/Cas12a-mediated fast direct biosynthetic gene clustercloning platfo...
【文章来源】：华东理工大学上海市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
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优化与ＣＡＴ－ＦＩＳＨＩＮＧ技术的建立与表??征??３．１?ＣＡＴ－ＦＩＳＨ丨ＮＧ技术设计原理??通过偶联ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓｌ２ａ的ＤＮＡ切割活性与ＢＡＣ文库构建的独特特性，我们开??发了?ＣＡＴ－ＦＩＳＨＩＮＧ?（Ｃ’ＲｌＳＰＲ／Ｃａｓｌ２ａ－ｍｅｄｉａｔｅｄ?ｆａｓｔ?ｄｉｒｅｃｔ?ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ?ｇｅｎｅ?ｃｌｕｓｔｅｒ?ｃｌｏｎｉｎｇ??ｐｌａｔｆｏｒｍ），这是一个ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓｌ２ａ介导的简单快速的生物合成基因簇直接克隆平台，??可实现大型ＢＧＣ的体外克拢图３－１展示了?ＣＡＴ－ＦＩＳＨＩＮＧ的三步流程图。??ＤＮ?Ａ?ｓａｍｐｌｅ?ｉｓｏｌａｔｉｏｎ?Ｆｌａｎｋｅｄ?ｈｏｍｏｌｏｇ?ａｒｍｓ?ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ??（ｅ．ｇ．?ｇｅｎｏｍｉｃ?ＤＮＡ）???＼?￣?ＰＣＲ????ｋ?ｆ?ＰＡＭ２?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?」?■ＨＥＩｄ＂??Ｈｏｍｏｌｏｇ?ａｒｍｓ?ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ??ｉ?ｒ?ｂｙ?Ｇｉｂｓｏｎ?ａｓｓｅｍｂｌｙ??Ｄｉｇｅｓｔｅｄ?ｂｙ??ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ１２ａ?Ｃａｐｔｕｒｅ?ｐｌａｓｍｉｄ?ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ??Ｔａｒｇｅｔ?ＢＧＣ?（＿＞??（Ｗｉｔｈ?ｓｔａｇｇｅｒｅｄ?Ｃａｓ１２ａ?ｃｌｅａｖａｇｅ?ｓｉｔｅｓ）?｜??￣￣３?＇?ｏｒｉＳ?＾??＋?＾??Ｌｉｎｅａｒ?ｃａｐｔｕｒｅ?ｐｌａｓｍｉｄ?Ｐｌａｓｍｉｄ?ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ?ｔａｒｇｅｔ?ＢＧＣ??（ｗｉｔｈ?ｓｔａｇｇｅｒｅｄ?Ｃａｓ１２ａ?ｃｌｅａｖａｇｅ?ｓｉｔｅｓ）??Ｌｉｇａｔｉｏｎ?＆??ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ??ｏｒｉＳ??ｏ
本文编号：3338493
【文章来源】：华东理工大学上海市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
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本文编号：3338493
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