基于CRISPR的月季RcTCP基因编辑技术研究
发布时间：2021-08-12 18:09
TCP基因家族是植物特异性转录因子,并且在植物生长和发育过程中起重要的调节作用。为了探讨月季花器官发育中RcTCP9基因对其的影响,本研究通过CRISPR/Cas9基因编辑技术构建植物表达载体,其检测结果表明,成功构建了含月季RcTCP9基因的植物表达载体。以月季作为为试验材料,通过农杆菌介导的叶片浸入法瞬时转化月季,获得了表达eGFP的月季叶片。以月季组培苗为受体材料。得到了以下结果:1.本研究通过CRISPR/Cas9基因编辑技术,根据月季RcTCP9基因的保守序列,设计了一对互补引物,用T4连接酶连接到质粒载体pKSE402中,经测序后,表明含月季RcTCP9基因的植物表达载体构建成功。2.以月季作为试验材料,通过农杆菌介导的叶片浸入法瞬时转化月季叶片,获得了表达绿色荧光的月季叶片。由此表明构建的含月季TCP9基因的植物表达载体能够在月季中表达。3.为了保证经过农杆菌浸染过后月季腋芽的正常生长,防止农杆菌增殖过快以及筛选抗性芽,选用Kan和Cef对月季腋芽进行共同作用试验,将月季腋芽分别置于还有不同浓度Kan和Cef的芽诱导培养基中,观察其腋芽的萌发及生长情况。最终选择含150 ...
【文章来源】：湖南农业大学湖南省
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
大肠杆菌PCR结果
第二章含pKSE402-TCP9重组质粒载体的构建152.5.2pKSE402-RcTCP9重组质粒的鉴定将PCR检测正确的大肠杆菌活化，使用质粒提取小试剂盒提取质粒，以质粒为模板，进行PCR扩增，并进行1.5%琼脂糖凝胶电泳，用GelDocXR+凝胶成像系统进行拍照记录，得到的条带大小为99bp（图2-2）。并将PCR检测正确的质粒送往生工生物工程(上海)股份有限公司测序。图2-3为载体的物理图谱。图2-2：大肠杆菌质粒PCR结果M：分子量标准markerDL2000；CK：ddH2O；1-4：含RcTCP9基因的重组质粒载体Fig.2-2TheresultsofplasmidPCRinE.coliM：DNAmarkerDL2000；CK：ddH2O；1-4：RecombinantplasmidvectorcontainingRcTCP9gene图2-3：pKSE402-RcTCP9载体物理图谱Fig.2-3PhysicalAtlasofpKSE402-RcTCP9carrier
第二章含pKSE402-TCP9重组质粒载体的构建152.5.2pKSE402-RcTCP9重组质粒的鉴定将PCR检测正确的大肠杆菌活化，使用质粒提取小试剂盒提取质粒，以质粒为模板，进行PCR扩增，并进行1.5%琼脂糖凝胶电泳，用GelDocXR+凝胶成像系统进行拍照记录，得到的条带大小为99bp（图2-2）。并将PCR检测正确的质粒送往生工生物工程(上海)股份有限公司测序。图2-3为载体的物理图谱。图2-2：大肠杆菌质粒PCR结果M：分子量标准markerDL2000；CK：ddH2O；1-4：含RcTCP9基因的重组质粒载体Fig.2-2TheresultsofplasmidPCRinE.coliM：DNAmarkerDL2000；CK：ddH2O；1-4：RecombinantplasmidvectorcontainingRcTCP9gene图2-3：pKSE402-RcTCP9载体物理图谱Fig.2-3PhysicalAtlasofpKSE402-RcTCP9carrier
【参考文献】：
期刊论文
[1]Efficient BoPDS Gene Editing in Cabbage by the CRISPR/Cas9 System[J]. Cunfa Ma,Mengci Liu,Qinfei Li,Jun Si,Xuesong Ren,Hongyuan Song. Horticultural Plant Journal. 2019(04)
[2]Reduction in cadmium accumulation in japonica rice grains by CRISPR/Cas9-mediated editing of OsNRAMP5[J]. YANG Chang-hong,ZHANG Yang,HUANG Chao-feng. Journal of Integrative Agriculture. 2019(03)
[3]水稻膜联蛋白基因OsAnn8干旱和低温条件下表达模式以及CRISPR/Cas9定点编辑[J]. 却志群,於紫蕾,沈春修. 华北农学报. 2019(01)
[4]铁观音茶树转录因子TCP4基因的克隆与序列分析[J]. 魏沙沙,邱小凤,蔡雪玲,孙威江,陈志丹. 茶叶学报. 2018(03)
[5]利用绿色荧光蛋白GFP研究稻瘟病菌与水稻的互作[J]. 许有嫔,廖海澄,陈金华,罗櫞,宿加,邹成东,李伟滔,王静,马炳田,贺闽,陈学伟. 植物保护. 2017(06)
[6]CRISPR/Cas9系统研究进展及应用[J]. 王亚萍,谭玉梅,刘永翔,刘作易. 贵州农业科学. 2017(01)
[7]TCP家族基因研究进展[J]. 刘丽娟,高辉. 生物技术通报. 2016(09)
[8]CRISPR/Cas9技术的应用性研究[J]. 舒磊磊,甲芝莲,吴勇浒,索伦,贾丽玲. 畜牧兽医学报. 2016(07)
[9]基于CRISPR/Cas9技术的烟草NtDXR基因敲除及功能分析[J]. 聂梦云,高军平,罗培,陈晓乐,易小慧,王根洪,夏庆友. 烟草科技. 2016(06)
[10]CRISPR/Cas9介导靶向敲除拟南芥GGB基因突变体的鉴定[J]. 雷建峰,徐新霞,李月,代培红,刘超,刘晓东. 西北植物学报. 2016(05)
博士论文
[1]拟南芥TCP11调控维管束的发育[D]. 安家兴.兰州大学 2012
硕士论文
[1]基于CRISPR/Cas9系统的水稻重要基因定点编辑技术研究[D]. 郑才敏.华南农业大学 2016
[2]西瓜TCP转录因子的鉴定及功能分析[D]. 时丕彪.浙江大学 2016
[3]‘月月红’月季胚性愈伤组织诱导及遗传转化基础研究[D]. 易星.湖南农业大学 2014
[4]拟南芥TCP15、TCP22基因功能的研究[D]. 张春雷.兰州大学 2012
本文编号：3338815
【文章来源】：湖南农业大学湖南省
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
大肠杆菌PCR结果
第二章含pKSE402-TCP9重组质粒载体的构建152.5.2pKSE402-RcTCP9重组质粒的鉴定将PCR检测正确的大肠杆菌活化，使用质粒提取小试剂盒提取质粒，以质粒为模板，进行PCR扩增，并进行1.5%琼脂糖凝胶电泳，用GelDocXR+凝胶成像系统进行拍照记录，得到的条带大小为99bp（图2-2）。并将PCR检测正确的质粒送往生工生物工程(上海)股份有限公司测序。图2-3为载体的物理图谱。图2-2：大肠杆菌质粒PCR结果M：分子量标准markerDL2000；CK：ddH2O；1-4：含RcTCP9基因的重组质粒载体Fig.2-2TheresultsofplasmidPCRinE.coliM：DNAmarkerDL2000；CK：ddH2O；1-4：RecombinantplasmidvectorcontainingRcTCP9gene图2-3：pKSE402-RcTCP9载体物理图谱Fig.2-3PhysicalAtlasofpKSE402-RcTCP9carrier
第二章含pKSE402-TCP9重组质粒载体的构建152.5.2pKSE402-RcTCP9重组质粒的鉴定将PCR检测正确的大肠杆菌活化，使用质粒提取小试剂盒提取质粒，以质粒为模板，进行PCR扩增，并进行1.5%琼脂糖凝胶电泳，用GelDocXR+凝胶成像系统进行拍照记录，得到的条带大小为99bp（图2-2）。并将PCR检测正确的质粒送往生工生物工程(上海)股份有限公司测序。图2-3为载体的物理图谱。图2-2：大肠杆菌质粒PCR结果M：分子量标准markerDL2000；CK：ddH2O；1-4：含RcTCP9基因的重组质粒载体Fig.2-2TheresultsofplasmidPCRinE.coliM：DNAmarkerDL2000；CK：ddH2O；1-4：RecombinantplasmidvectorcontainingRcTCP9gene图2-3：pKSE402-RcTCP9载体物理图谱Fig.2-3PhysicalAtlasofpKSE402-RcTCP9carrier
【参考文献】：
期刊论文
[1]Efficient BoPDS Gene Editing in Cabbage by the CRISPR/Cas9 System[J]. Cunfa Ma,Mengci Liu,Qinfei Li,Jun Si,Xuesong Ren,Hongyuan Song. Horticultural Plant Journal. 2019(04)
[2]Reduction in cadmium accumulation in japonica rice grains by CRISPR/Cas9-mediated editing of OsNRAMP5[J]. YANG Chang-hong,ZHANG Yang,HUANG Chao-feng. Journal of Integrative Agriculture. 2019(03)
[3]水稻膜联蛋白基因OsAnn8干旱和低温条件下表达模式以及CRISPR/Cas9定点编辑[J]. 却志群,於紫蕾,沈春修. 华北农学报. 2019(01)
[4]铁观音茶树转录因子TCP4基因的克隆与序列分析[J]. 魏沙沙,邱小凤,蔡雪玲,孙威江,陈志丹. 茶叶学报. 2018(03)
[5]利用绿色荧光蛋白GFP研究稻瘟病菌与水稻的互作[J]. 许有嫔,廖海澄,陈金华,罗櫞,宿加,邹成东,李伟滔,王静,马炳田,贺闽,陈学伟. 植物保护. 2017(06)
[6]CRISPR/Cas9系统研究进展及应用[J]. 王亚萍,谭玉梅,刘永翔,刘作易. 贵州农业科学. 2017(01)
[7]TCP家族基因研究进展[J]. 刘丽娟,高辉. 生物技术通报. 2016(09)
[8]CRISPR/Cas9技术的应用性研究[J]. 舒磊磊,甲芝莲,吴勇浒,索伦,贾丽玲. 畜牧兽医学报. 2016(07)
[9]基于CRISPR/Cas9技术的烟草NtDXR基因敲除及功能分析[J]. 聂梦云,高军平,罗培,陈晓乐,易小慧,王根洪,夏庆友. 烟草科技. 2016(06)
[10]CRISPR/Cas9介导靶向敲除拟南芥GGB基因突变体的鉴定[J]. 雷建峰,徐新霞,李月,代培红,刘超,刘晓东. 西北植物学报. 2016(05)
博士论文
[1]拟南芥TCP11调控维管束的发育[D]. 安家兴.兰州大学 2012
硕士论文
[1]基于CRISPR/Cas9系统的水稻重要基因定点编辑技术研究[D]. 郑才敏.华南农业大学 2016
[2]西瓜TCP转录因子的鉴定及功能分析[D]. 时丕彪.浙江大学 2016
[3]‘月月红’月季胚性愈伤组织诱导及遗传转化基础研究[D]. 易星.湖南农业大学 2014
[4]拟南芥TCP15、TCP22基因功能的研究[D]. 张春雷.兰州大学 2012
本文编号：3338815
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3338815.html
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