花生FAD2基因的表达分析及上游调控因子的初步筛选
发布时间：2021-08-14 12:41
低温是限制植物分布,影响植物生长发育的重要因素。植物处于低温环境中时,最初感知到冷信号后,机体在Ca2+、激素（如ABA）以及各种渗透调节物质水平上发生变化。这些变化通过一系列的信号转导,最终诱导冷调节基因调控网络的启动,从而调控植物机体的抗冷性。在冷胁迫响应过程中发挥重要作用不仅包括这些生理指标,还有各种转录因子的参与。FAD2基因是编码脂肪酸脱氢酶的基因。在高等植物中,FAD2基因大多都存在2个以上的拷贝,且不同拷贝的FAD2基因的表达模式以及功能也各不相同。植物中的FAD2基因分为两类:一类为组成性表达的,主要参与膜脂中不饱和脂肪酸的合成;另一类为种子特异性表达的,主要在储藏脂不饱和脂肪酸合成过程中发挥作用。前期研究中,本实验室已得到两个拷贝的FAD2基因（AhFAD2A和AhFAD2B）,这两个基因中存在着可变剪接,其中已确定在种子中表达的A2和B2剪接体参与储藏脂不饱和脂肪酸的合成。A4B4剪接体为组成性表达,推测该剪接体与膜脂的合成有关。另外,在花生基因组中可能还存在着其他拷贝的FAD2。基于这些问题,对花生ESTs数据库进行了比对分析,通过拼接序列的...
【文章来源】：山东师范大学山东省
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
拟南芥中冷响应转录调控网络示意图
3.1 酵母单杂交技术的原理酵母单杂交技术是研究 DNA（顺式作用元件）与蛋白质（转录因子）相互作用的主要方法之一。酵母中有一种特殊的转录因子 GAL4 蛋白，在这个蛋白中包含两部分特殊的结构域，DNA 结合区（DNA binding domain，BD）和目的基因转录激活区（aviting domain，AD），两个结构域能够各自行使功能，但只有在两者相互结合的条件下才能引起下游基因的表达。酵母单杂交就依赖于此基础上延伸而来。在酵母单杂交体系中，通过构建包含 GAL4 蛋白中的 AD 的 cDNA文库质粒，同时将目的基因片段以及下游报告基因包含在含有 BD 结构域的诱饵载体上。把含有 AD 和 BD 的两部分表达载体共同转化到酵母细胞中后， BD 中的下游报告基因的表达被启动，与目的基因发生相互作用的蛋白质在 cDNA 文库中就被筛选出来。
FAD2-2 基因的克隆FAD2-2 基因 cDNA 序列的获得花生（Arachis hypogaea. L.，AABB）组中存在 AhFAD2A 和 AhFAD2Bcbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）下载花生 ES contig express 软件进行拼接后，获得中 2 条分别对应 AhFAD2A 和 AhFAD码一个新的 AhFAD2 基因。生物信息学所获得的序列，设计特异性rfF 和 AhFAD2-2orfR。以花生（鲁花为模板，扩增目的 cDNA 序列，得到一
【参考文献】：
期刊论文
[1]低温条件下拔节期小麦叶片内源激素含量和抗氧化酶活性的变化[J]. 李春燕,徐雯,刘立伟,杨景,朱新开,郭文善. 应用生态学报. 2015(07)
[2]低温胁迫对番茄光合特性及抗氧化酶活性的影响[J]. 杨再强,张波,张继波,彭晓丹,张婷华,张静. 自然灾害学报. 2012(04)
[3]低温胁迫下聚糠萘合剂对玉米幼苗光合作用和抗氧化酶活性的影响[J]. 徐田军,董志强,兰宏亮,裴志超,高娇,解振兴. 作物学报. 2012(02)
[4]水稻OsFAD2、OsFAD6的克隆及其家族成员对非生物胁迫的响应[J]. 曹英萍,石金磊,李钟,明凤. 遗传. 2010(08)
[5]倒春寒对小麦的危害及防御措施[J]. 孙耀锋,高会杰,王少杰,李琳,陈勇超. 种业导刊. 2010(05)
[6]低温胁迫对甜瓜幼苗膜透性及膜脂过氧化物的影响[J]. 和红云,薛琳,田丽萍,陈远良. 北方园艺. 2008(06)
[7]低温弱光对辣椒叶片光合色素含量的影响[J]. 王萍,郭晓冬,赵鹏. 北方园艺. 2007(07)
[8]低温胁迫下钼对冬小麦抗氧化防御系统及膜脂过氧化的影响(英文)[J]. 孙学成,胡承孝,谭启玲. 植物生理与分子生物学学报. 2006(02)
[9]低温胁迫对苜蓿品种幼苗SOD、POD活性和脯氨酸含量的影响[J]. 冯昌军,罗新义,沙伟,王凤国. 草业科学. 2005(06)
[10]低温胁迫对玉米幼苗抗冷性的影响初探[J]. 张金龙,周有佳,胡敏,朱蕾,张达. 东北农业大学学报. 2004(02)
博士论文
[1]红花FAD2基因家族的克隆及高油酸红花分子机制研究[D]. 曹世江.东北师范大学 2013
硕士论文
[1]低温下冷敏感植物春小麦和抗寒植物冬小麦细胞内Ca～（2+）的稳态平衡能力的比较研究[D]. 刘炜.山东师范大学 2000
本文编号：3342485
【文章来源】：山东师范大学山东省
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
拟南芥中冷响应转录调控网络示意图
3.1 酵母单杂交技术的原理酵母单杂交技术是研究 DNA（顺式作用元件）与蛋白质（转录因子）相互作用的主要方法之一。酵母中有一种特殊的转录因子 GAL4 蛋白，在这个蛋白中包含两部分特殊的结构域，DNA 结合区（DNA binding domain，BD）和目的基因转录激活区（aviting domain，AD），两个结构域能够各自行使功能，但只有在两者相互结合的条件下才能引起下游基因的表达。酵母单杂交就依赖于此基础上延伸而来。在酵母单杂交体系中，通过构建包含 GAL4 蛋白中的 AD 的 cDNA文库质粒，同时将目的基因片段以及下游报告基因包含在含有 BD 结构域的诱饵载体上。把含有 AD 和 BD 的两部分表达载体共同转化到酵母细胞中后， BD 中的下游报告基因的表达被启动，与目的基因发生相互作用的蛋白质在 cDNA 文库中就被筛选出来。
FAD2-2 基因的克隆FAD2-2 基因 cDNA 序列的获得花生（Arachis hypogaea. L.，AABB）组中存在 AhFAD2A 和 AhFAD2Bcbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）下载花生 ES contig express 软件进行拼接后，获得中 2 条分别对应 AhFAD2A 和 AhFAD码一个新的 AhFAD2 基因。生物信息学所获得的序列，设计特异性rfF 和 AhFAD2-2orfR。以花生（鲁花为模板，扩增目的 cDNA 序列，得到一
【参考文献】：
期刊论文
[1]低温条件下拔节期小麦叶片内源激素含量和抗氧化酶活性的变化[J]. 李春燕,徐雯,刘立伟,杨景,朱新开,郭文善. 应用生态学报. 2015(07)
[2]低温胁迫对番茄光合特性及抗氧化酶活性的影响[J]. 杨再强,张波,张继波,彭晓丹,张婷华,张静. 自然灾害学报. 2012(04)
[3]低温胁迫下聚糠萘合剂对玉米幼苗光合作用和抗氧化酶活性的影响[J]. 徐田军,董志强,兰宏亮,裴志超,高娇,解振兴. 作物学报. 2012(02)
[4]水稻OsFAD2、OsFAD6的克隆及其家族成员对非生物胁迫的响应[J]. 曹英萍,石金磊,李钟,明凤. 遗传. 2010(08)
[5]倒春寒对小麦的危害及防御措施[J]. 孙耀锋,高会杰,王少杰,李琳,陈勇超. 种业导刊. 2010(05)
[6]低温胁迫对甜瓜幼苗膜透性及膜脂过氧化物的影响[J]. 和红云,薛琳,田丽萍,陈远良. 北方园艺. 2008(06)
[7]低温弱光对辣椒叶片光合色素含量的影响[J]. 王萍,郭晓冬,赵鹏. 北方园艺. 2007(07)
[8]低温胁迫下钼对冬小麦抗氧化防御系统及膜脂过氧化的影响(英文)[J]. 孙学成,胡承孝,谭启玲. 植物生理与分子生物学学报. 2006(02)
[9]低温胁迫对苜蓿品种幼苗SOD、POD活性和脯氨酸含量的影响[J]. 冯昌军,罗新义,沙伟,王凤国. 草业科学. 2005(06)
[10]低温胁迫对玉米幼苗抗冷性的影响初探[J]. 张金龙,周有佳,胡敏,朱蕾,张达. 东北农业大学学报. 2004(02)
博士论文
[1]红花FAD2基因家族的克隆及高油酸红花分子机制研究[D]. 曹世江.东北师范大学 2013
硕士论文
[1]低温下冷敏感植物春小麦和抗寒植物冬小麦细胞内Ca～（2+）的稳态平衡能力的比较研究[D]. 刘炜.山东师范大学 2000
本文编号：3342485
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3342485.html
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