竹黄菌（Shiraia bambusicola P. Hennings）veA基因功能初步研究及代谢组学分析

发布时间：2021-08-14 15:16

　　竹黄菌是寄生于特定竹子上的病原真菌,也是我国一种重要的药用真菌,其肉质子座竹黄是一种名贵稀有的中药材,其主要代谢产物之一竹红菌素具有抗菌,抗肿瘤,抗病毒等活性,且在光动力农药、食品添加剂及色素等方面具有很好的应用前景。但目前关于竹黄菌代谢产物及代谢调控的研究报道较少。对竹黄菌内代谢产物的调控网络进行研究具有十分重要的科学意义和社会应用价值。veA是真菌全局性调控因子,在次级代谢产物的合成、协调真菌形态发育及侵染宿主致毒致病等方面起到重要的调控作用。本研究以veA基因功能研究为出发点,建立竹黄菌原生质体制备和再生的适宜条件,构建veA敲除载体,运用PEG介导和农杆菌介导转化探究竹黄菌的遗传转化体系;通过代谢组学的方法比较分析不同发育时期竹黄代谢产物的差异。主要研究结果如下:1、对影响竹黄菌原生质体质量和产量的稳渗剂、酶解时间、酶液组合等条件进行优化,获得竹黄菌原生质体制备的最适条件为:取菌龄为5 d的菌丝,以0.6 mol/L NaCl配置1.5%崩溃酶+1%裂解酶的混合酶液,按20 mL酶液/1 g湿菌体比列,30℃酶解3 h可获得7.8×10⁶个/mL原生质体。... 

【文章来源】：贵州大学贵州省 211工程院校

【文章页数】：97 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

ShiraiaspSUPER-H168的形态结构A：隔膜菌丝体（2400×）；B：分生孢子器（2400×）；C：分生孢子器释放分生孢子（1000×）；D：分生孢子（10,000×）（Liangetal.,2009）

与分析质体制备条件优化剂种类对原生质体制备的影响渗剂对原生质体的释放与再生活性有很大影响，稳渗剂可以保生质体内外环境渗透压平衡，使原生质体处于稳定状态，保持采用 0.7 mol/L NaCl，0.6 mol/L 山梨醇糖、蔗糖、葡萄糖作为稳酶对培养 3d 的菌丝，30℃，100 r/min ，酶解 3 h 制备原生质，不同稳渗剂对原生质体的制备具有一定的影响，当稳渗剂为l 时，原生质体的产量最高（3.2×106个/ mL），以蔗糖为稳渗0.6×106个/ mL）。

随后降低（图2-2），稳渗剂过低不利于原生质的稳定和活性；浓度过高，影响原生质体的释放。故以 0.6 mol/L NaCl 为稳渗剂制备竹黄菌原生质体。

【参考文献】：
期刊论文
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[7]儿茶酚胁迫下铜绿微囊藻的生理生化响应[J]. 李延,刘丽君,梁文艳.  环境工程学报. 2016(06)
[8]竹黄菌原生质体的制备与再生分析[J]. 魏洪美,任锡毅,杨兵,黄青青,刘永翔,乙引.  基因组学与应用生物学. 2016(04)
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[10]竹黄菌Ku70基因全长克隆及序列分析[J]. 黄青青,任锡毅,谭玉梅,魏洪美,乙引,刘永翔.  基因组学与应用生物学. 2015(12)

硕士论文
[1]产去乙酰真菌环氧二烯（DAM）菌株全局性调控因子veA的克隆及功能验证[D]. 康灿昆.福建师范大学 2014
[2]一株产石杉碱甲蛇足石杉内生真菌的分离及其发酵条件的初步研究[D]. 王吉祥.江西师范大学 2010
[3]竹黄菌（Shiraia bambusicola）生物学性状及其人工培养技术研究[D]. 林海萍.浙江大学 2002



本文编号：3342702