细叶百合LpWRKY20基因的克隆及其对烟草的遗传转化
发布时间：2021-08-15 09:08
细叶百合(Lilium pumilum 花下垂、花被片反卷、花朵娇艳。是一种重要的观赏性花卉,是百合抗性育种的重要亲本。本研究从细叶百合转录组中筛选出WRKY转录因子家族,分析该家族在休眠解除过程中的表达情况;从中选取对休眠解除具有调控作用的基因,分析其对非生物胁迫的响应;克隆该基因并对其进行生物信息学分析;构建植物表达载体转化到烟草中;对转基因植株进行干旱胁迫,通过对干旱胁迫下的表型观察及生理指标测定,明确该基因是否具有抗旱功能。本文主要研究结果如下:1.通过分析细叶百合休眠解除转录组中的WRKY转录因子家族,从中共分离出了40个WRKY转录因子,其中GroupⅠ共有6个基因、GroupII共有28个基因、GroupⅢ有6个基因。随着休眠解除LpWRKY20基因的相对表达量逐渐升高,证明其参与了休眠解除的过程。2.在休眠过程中往往伴随着非生物的胁迫,荧光定量分析表明在不同的非生物胁迫中LpWRKY20表达量存在差异且在不同的组织器官中表达模式也不相同。干旱胁迫下LpWRKY20在鳞茎中出现了明显的上调表达,推测基因对干旱的响应较为敏感。3.该基因开放阅读框（ORF）为1899bp,预...
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１细叶百合ＷＲＫＹ转录因子进化树??Ｆｉｇｕ?
２．２．４低温储藏不同吋期■相对表达量分析??采用ｑＲＴ－ＰＣＲ法对细叶百合鱗茎在低温贮藏Ｏｄ?（ＳＩ）、３０ｄ?（Ｓ２）、６０ｄ?（Ｓ３）、９０ｄ??（Ｓ４）期间Ｚｐ奶况７２０基因相对表达量进行分析（图２－４），结果表明，基??因在休眠解除的过程中表达量总体呈现上升的趋势，在Ｓ１时期表达量较低，Ｓ２与Ｓ１??时期相对表达量基本保持一致，Ｓ３时期是Ｓ１时期的４．８倍，Ｓ４时期相对表达量显著升??高
３．３．１干旱胁迫对的表达影响??在ＰＥＧ模拟干旱条件下，Ｚｐ奶？／了２０基因的表达模式在百合不同器官内表现出差??异（图３－１）。在叶片中随着干旱时间的延长表达量总体呈现下调表达，３ｈ时表达量最??低。ｌｈ、３ｈ表达量低于对照组；６ｈ、１２ｈ、２４ｈ表达量较之前有所提升，但依然低于对??照组；其后在４８ｈ表达量继续下调。在鳞茎中随着干旱时间的延长表达量呈现先增加后??降低的趋势。ｌｈ时相对表达量与对照相比并无显著变化；此后表达量逐渐升高，并在??６ｈ时达到顶峰，为对照组的２．６倍；１２ｈ、２４ｈ和４８ｈ又下调表达，但均高于对照组。在??根中随着时间的延长表达量变化较小，仅在ｌｈ时表达量呈现明显的下调，其余时间段??变化不明显。Ｚｐ阶兄ＳＴ２０基因在细叶百合遭受干旱胁迫时会产生调控反应并在不同的组??织器官中呈现出差异性，在鳞茎中对干旱的响应作用强于根、叶，表明在鳞??茎中具有明显的调节作用。??３．５￣］??ａ??３－??．２?Ｂ?ａ??｜?＾?１?ａ??ｌ－?ａｆ?ｆ?Ｉ?｜ａ?Ｉ?！?ｊｌ??■ｌｉｌｌｉｌｒ??〇?；?￣￣＼￣￣１?＼￣￣＊??Ｏｈ?ｌｈ?３ｈ?６ｈ?１２ｈ?２４ｈ?４８ｈ??ｓｔｒｅｓｓ?ｔｉｍｅ?（ｈ）??图３－１干旱胁迫下在细叶百合不同组织中的相对表达＃??不同小写字母表示在ｐ＜〇．〇５水平上差异显著
【参考文献】：
期刊论文
[1]小麦转录因子基因TaWRKY33的耐盐性分析[J]. 张惠媛,刘永伟,杨军峰,张双喜,于太飞,陈隽,陈明,周永斌,马有志,徐兆师,付金东. 中国农业科学. 2018(24)
[2]AtWRKY40参与拟南芥干旱胁迫响应过程[J]. 车永梅,孙艳君,卢松冲,赵方贵,侯丽霞,刘新. 植物生理学报. 2018(03)
[3]百合转P5CS-F129A基因的遗传稳定性和耐旱性检测[J]. 闫笑,魏迟,张冬梅,贾桂霞. 北京林业大学学报. 2018(02)
[4]樱桃bHLH转录因子家族基因鉴定及表达分析[J]. 应炎标,朱友银,郭卫东,陈文荣,宗宇,张婷,汤腾跃,李永强. 分子植物育种. 2018(14)
[5]干旱胁迫对东方百合根叶生理功能及花粉育性的影响[J]. 贾文杰,王祥宁,马璐琳,段青,杜文文,崔光芬. 西北植物学报. 2017(11)
[6]异源表达irrE转基因烟草的耐盐耐旱性[J]. 赵雷霖,范鑫,聂星,梁成真,张锐,孙国清,孟志刚,林敏,王远,郭三堆. 中国农业科学. 2017(20)
[7]芍药PlGA20ox基因的克隆及其在芽内休眠解除进程中的表达分析[J]. 韩璐璐,李俊杰,马燕,国静,郭先锋. 植物生理学报. 2017(04)
[8]植物WRKY转录因子及其生物学功能研究进展[J]. 谢政文,王连军,陈锦洋,王娇,苏一钧,杨新笋,曹清河. 中国农业科技导报. 2016(03)
[9]赤霉素氧化酶PsGA20ox基因参与低温诱导的牡丹内休眠解除[J]. 张玉喜,张文超,李玉娥,刘春英,郑国生,盖树鹏. 华北农学报. 2014(03)
[10]球根植物休眠调控的分子机制研究进展[J]. 刘芳,王家艳,周蕴薇. 草业学报. 2013(06)
博士论文
[1]拟南芥WRKY转录因子在非生物胁迫响应中的功能研究[D]. 丁忠杰.浙江大学 2014
硕士论文
[1]细叶百合LpSVP基因的克隆及其对烟草的遗传转化[D]. 汪王.东北林业大学 2018
[2]百合（Lilium）生物学特性及远缘杂交不亲和性的研究[D]. 樊金萍.东北农业大学 2003
本文编号：3344252
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１细叶百合ＷＲＫＹ转录因子进化树??Ｆｉｇｕ?
２．２．４低温储藏不同吋期■相对表达量分析??采用ｑＲＴ－ＰＣＲ法对细叶百合鱗茎在低温贮藏Ｏｄ?（ＳＩ）、３０ｄ?（Ｓ２）、６０ｄ?（Ｓ３）、９０ｄ??（Ｓ４）期间Ｚｐ奶况７２０基因相对表达量进行分析（图２－４），结果表明，基??因在休眠解除的过程中表达量总体呈现上升的趋势，在Ｓ１时期表达量较低，Ｓ２与Ｓ１??时期相对表达量基本保持一致，Ｓ３时期是Ｓ１时期的４．８倍，Ｓ４时期相对表达量显著升??高
３．３．１干旱胁迫对的表达影响??在ＰＥＧ模拟干旱条件下，Ｚｐ奶？／了２０基因的表达模式在百合不同器官内表现出差??异（图３－１）。在叶片中随着干旱时间的延长表达量总体呈现下调表达，３ｈ时表达量最??低。ｌｈ、３ｈ表达量低于对照组；６ｈ、１２ｈ、２４ｈ表达量较之前有所提升，但依然低于对??照组；其后在４８ｈ表达量继续下调。在鳞茎中随着干旱时间的延长表达量呈现先增加后??降低的趋势。ｌｈ时相对表达量与对照相比并无显著变化；此后表达量逐渐升高，并在??６ｈ时达到顶峰，为对照组的２．６倍；１２ｈ、２４ｈ和４８ｈ又下调表达，但均高于对照组。在??根中随着时间的延长表达量变化较小，仅在ｌｈ时表达量呈现明显的下调，其余时间段??变化不明显。Ｚｐ阶兄ＳＴ２０基因在细叶百合遭受干旱胁迫时会产生调控反应并在不同的组??织器官中呈现出差异性，在鳞茎中对干旱的响应作用强于根、叶，表明在鳞??茎中具有明显的调节作用。??３．５￣］??ａ??３－??．２?Ｂ?ａ??｜?＾?１?ａ??ｌ－?ａｆ?ｆ?Ｉ?｜ａ?Ｉ?！?ｊｌ??■ｌｉｌｌｉｌｒ??〇?；?￣￣＼￣￣１?＼￣￣＊??Ｏｈ?ｌｈ?３ｈ?６ｈ?１２ｈ?２４ｈ?４８ｈ??ｓｔｒｅｓｓ?ｔｉｍｅ?（ｈ）??图３－１干旱胁迫下在细叶百合不同组织中的相对表达＃??不同小写字母表示在ｐ＜〇．〇５水平上差异显著
【参考文献】：
期刊论文
[1]小麦转录因子基因TaWRKY33的耐盐性分析[J]. 张惠媛,刘永伟,杨军峰,张双喜,于太飞,陈隽,陈明,周永斌,马有志,徐兆师,付金东. 中国农业科学. 2018(24)
[2]AtWRKY40参与拟南芥干旱胁迫响应过程[J]. 车永梅,孙艳君,卢松冲,赵方贵,侯丽霞,刘新. 植物生理学报. 2018(03)
[3]百合转P5CS-F129A基因的遗传稳定性和耐旱性检测[J]. 闫笑,魏迟,张冬梅,贾桂霞. 北京林业大学学报. 2018(02)
[4]樱桃bHLH转录因子家族基因鉴定及表达分析[J]. 应炎标,朱友银,郭卫东,陈文荣,宗宇,张婷,汤腾跃,李永强. 分子植物育种. 2018(14)
[5]干旱胁迫对东方百合根叶生理功能及花粉育性的影响[J]. 贾文杰,王祥宁,马璐琳,段青,杜文文,崔光芬. 西北植物学报. 2017(11)
[6]异源表达irrE转基因烟草的耐盐耐旱性[J]. 赵雷霖,范鑫,聂星,梁成真,张锐,孙国清,孟志刚,林敏,王远,郭三堆. 中国农业科学. 2017(20)
[7]芍药PlGA20ox基因的克隆及其在芽内休眠解除进程中的表达分析[J]. 韩璐璐,李俊杰,马燕,国静,郭先锋. 植物生理学报. 2017(04)
[8]植物WRKY转录因子及其生物学功能研究进展[J]. 谢政文,王连军,陈锦洋,王娇,苏一钧,杨新笋,曹清河. 中国农业科技导报. 2016(03)
[9]赤霉素氧化酶PsGA20ox基因参与低温诱导的牡丹内休眠解除[J]. 张玉喜,张文超,李玉娥,刘春英,郑国生,盖树鹏. 华北农学报. 2014(03)
[10]球根植物休眠调控的分子机制研究进展[J]. 刘芳,王家艳,周蕴薇. 草业学报. 2013(06)
博士论文
[1]拟南芥WRKY转录因子在非生物胁迫响应中的功能研究[D]. 丁忠杰.浙江大学 2014
硕士论文
[1]细叶百合LpSVP基因的克隆及其对烟草的遗传转化[D]. 汪王.东北林业大学 2018
[2]百合（Lilium）生物学特性及远缘杂交不亲和性的研究[D]. 樊金萍.东北农业大学 2003
本文编号：3344252
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3344252.html
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