双基因敲除减毒单增李斯特菌（ΔactA/ΔinlB）的构建及其生物学初步鉴定

发布时间：2021-08-15 13:13

　　减毒单增李斯特菌具有成为疫苗活载体的潜力,可同时引起MHCⅠ和MHCⅡ类抗原递呈系统,具有强烈激发CD8+和CD4+细胞免疫的能力。构建毒力基因缺失菌株进而评估其生物活性对于其作为疫苗活载体的开发尤为重要。本文采用同源重组技术构建单缺失菌株Lm-△act A和双缺失菌株Lm-△act A△/inl B,从生长状态、毒力基因表达和对Hep G2细胞侵袭能力方面探讨减毒菌株生物学特性。生长活性测定显示两种减毒菌株和野生型Lm（EGD-e）三者生长状况无差异;实时定量PCR结果显示act A基因缺失后,inl A基因表达水平上升两倍;act A和inl B基因双缺失后,plc B和hly基因的表达水平都有较大幅度的上升;侵袭Hep G2细胞结果显示act A基因缺失后侵袭能力增强、act A和inl B基因共同缺失后侵袭能力减弱。因此,减毒菌株的构建及其生物特性研究不仅对食源性致病菌Lm致病机理具有重要意义,也为构建预防人类和动物疫病的疫苗载体奠定了基础。 

【文章来源】：现代食品科技. 2016,32(07)北大核心

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要试剂和仪器
    1.2 菌株、质粒及细胞
    1.3 双缺失减毒株(Lm-Δact A/Δinl B)的构建
        1.3.1 引物
        1.3.2 Lm-Δinl B菌株inl B基因缺失的验证
        1.3.3 重组质粒p KSV7-act A(P1/P4)的构建
        1.3.4 减毒株Lm-Δact A/Δinl B的构建
    1.4 减毒株Lm-Δact A/Δinl B生物特性研究
        1.4.1 Lm(EGD-e)、Lm-Δact A、Lm-Δact A/Δinl B的生长情况
        1.4.2 RT-PCR检测Lm-Δact A、Lm-Δact A/Δinl B主要毒力基因表达检测
        1.4.3 Lm(EGD-e)、Lm-Δact A、Lm-Δinl B、Lm-Δact A/Δinl B侵袭Hep G2细胞
    1.5 数据分析方法
2 结果与讨论
    2.1 Lm-Δinl B菌株inl B基因缺失验证结果
    2.2 重组质粒p KSV7-act A(P1/P4)的构建结果
    2.3 减毒株Lm-Δact A/Δinl B的构建结果
    2.4 Lm(EGD-e)、Lm-Δact A、Lm-Δact A/Δinl B生长曲线
    2.5 Lm-Δact A、Lm-Δact A/Δinl B各毒力基因的表达水平
    2.6 Lm(EGD-e)、Lm-Δact A、Lm-Δinl B、Lm-Δact A/Δinl B对Hep G2细胞侵袭结果
3 结论



本文编号：3344618