SIRT1基因对乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制初探
发布时间：2021-08-17 12:24
目的:本研究旨在探索沉默信息调节因子1（silent information regulator1,SIRT1）在乳腺癌中的表达水平和对乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,并对其可能的作用机制进行初步探索,以期为乳腺癌的诊断、治疗提供新的思路。方法:1、通过免疫组织化学实验测定乳腺癌组织和癌旁组织中SIRT1的表达情况。2、通过实时荧光定量PCR（q RT-PCR）技术和蛋白免疫印迹（Western-blot）技术测定人正常乳腺上皮细胞MCF-10A、人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231中SIRT1 m RNA和蛋白的表达水平。3、通过慢病毒载体转染技术分别下调、上调SIRT1在MCF-7细胞中的表达,并应用q RT-PCR技术和Western-blot技术验证转染效率,获取稳转细胞株。4、通过CCK-8增殖实验检测下调和上调SIRT1后各组细胞的增殖能力。5、通过Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验检测下调和过表达SIRT1后各组细胞的迁移、侵袭能力。6、通过Western-blot技术检测SIRT1下调和上调后对p53、p125蛋白表达水平的影...
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：91 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
免疫组化测定SIRT1在人乳腺癌组织（A）和癌旁组织（B）的表达情况（×100）
SIRT1 基因对乳腺癌 MCF-7 细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制初探 qRT-PCR 结果显示，SIRT1 mRNA 在 MCF-10A（ 1.01±0.12 ） , 在 MCF-7 细 胞中 的 相 对表 达 MDA-MB-231 中的相对表达量为（2.65±0.23），组＜0.05）。经两两比较得出，MCF-7 细胞中 SIRT1MDA-MB-231 细胞（p＜0.05）和 MCF-10A 细胞（细胞中 SIRT1 mRNA 相对表达量也高于 MCF-10A
图 4-3 Western-blot 检测 SIRT1 在 MCF-10A、MCF-7、MDA-MB-231 中的蛋白相对表达量与 MCF-10A 细胞和 MDA-MB-231 细胞相比；**P<0.05，与 MCF-10A 细胞和 MCF-7 细胞Fig.4-3 The protein levels of SIRT1 was measured in MCF-10A cells、MCF-7 cells and MDcells by Western-blot. *P<0.05 versus MCF-10A cells and MDA-MB-231 cells; **P<0MCF-10A and MCF-7 cells.3、慢病毒载体转染 MCF-7 细胞的转染效率3.1 GFP（绿色荧光蛋白）法验证转染效率在 MOI=30 的条件下，用沉默和过表达 SIRT1 慢病毒颗粒、相性对照慢病毒颗粒感染MCF-7 细胞，分组为 KD 组（下调 SIRT1 组）、组（下调 SIRT1 阴性对照组）,OE 组（上调 SIRT1 组）、NC-OE 组SIRT1 阴性对照组）、Control 组（空白对照组）。72h 后倒置荧光显观察荧光细胞所占比例，对转染效率进行初步判断。当荧光细胞比
【参考文献】：
期刊论文
[1]Direct modification of spermatogonial stem cells using lentivirus vectors in vivo leads to efficient generation of transgenic rats[J]. Bang-Jin Kim,Yong-Hee Kim,Myeong-Geun Oh,Ki-Jung Kim,Sang-Eun Jung,Ju-Hee Jin,Sun-Uk Kim,Kwan-Sik Min,Buom-Yong Ryu. Asian Journal of Andrology. 2019(02)
[2]自噬相关蛋白mTOR、LC3-Ⅱ及HIF-1α与PM/DM的相关性[J]. 钟勇,柴克霞. 中国高原医学与生物学杂志. 2018(04)
[3]吡格列酮对2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝大鼠肝组织SIRT1、UCP2表达的影响[J]. 李楠,徐静,成淑英,王翔,农晰婷. 山西医科大学学报. 2018(12)
[4]自噬与衰老相关性疾病[J]. 王哲,王佳贺. 实用老年医学. 2018(12)
[5]冠心病患者外周血内皮祖细胞sirtuins家族表达分析[J]. 范力宏,张卫萍,乌宇亮,王亭忠,杜媛,白晓君. 临床心血管病杂志. 2018(10)
[6]SIRT1蛋白在胃癌组织的表达及其临床病理意义[J]. 梁群英,秦珍珠,王丹. 临床医学工程. 2018(10)
[7]Transwell法检测细胞侵袭迁移能力实验中的影响因素[J]. 唐秋琳,毕锋. 实验科学与技术. 2018(04)
[8]SIRT1调节2型糖尿病代谢的研究进展[J]. 陆海英,李志杰,张悦. 生命科学. 2018(08)
[9]miR-34a通过下调SIRT1抑制乳腺癌干细胞机制研究[J]. 李晓锋,汪园园,刘希. 陕西医学杂志. 2018(06)
[10]沉默信息调节因子-1及上皮性钙黏附素在胃癌中的表达及其相关性[J]. 李明辉,赵静雅,董永杰,李玉梅,冯运章,霍双. 现代肿瘤医学. 2018(12)
硕士论文
[1]SIRT1在宫颈癌发生发展及化疗耐药中作用的初步研究[D]. 齐月雯.青岛大学 2018
本文编号：3347762
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：91 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
免疫组化测定SIRT1在人乳腺癌组织（A）和癌旁组织（B）的表达情况（×100）
SIRT1 基因对乳腺癌 MCF-7 细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制初探 qRT-PCR 结果显示，SIRT1 mRNA 在 MCF-10A（ 1.01±0.12 ） , 在 MCF-7 细 胞中 的 相 对表 达 MDA-MB-231 中的相对表达量为（2.65±0.23），组＜0.05）。经两两比较得出，MCF-7 细胞中 SIRT1MDA-MB-231 细胞（p＜0.05）和 MCF-10A 细胞（细胞中 SIRT1 mRNA 相对表达量也高于 MCF-10A
图 4-3 Western-blot 检测 SIRT1 在 MCF-10A、MCF-7、MDA-MB-231 中的蛋白相对表达量与 MCF-10A 细胞和 MDA-MB-231 细胞相比；**P<0.05，与 MCF-10A 细胞和 MCF-7 细胞Fig.4-3 The protein levels of SIRT1 was measured in MCF-10A cells、MCF-7 cells and MDcells by Western-blot. *P<0.05 versus MCF-10A cells and MDA-MB-231 cells; **P<0MCF-10A and MCF-7 cells.3、慢病毒载体转染 MCF-7 细胞的转染效率3.1 GFP（绿色荧光蛋白）法验证转染效率在 MOI=30 的条件下，用沉默和过表达 SIRT1 慢病毒颗粒、相性对照慢病毒颗粒感染MCF-7 细胞，分组为 KD 组（下调 SIRT1 组）、组（下调 SIRT1 阴性对照组）,OE 组（上调 SIRT1 组）、NC-OE 组SIRT1 阴性对照组）、Control 组（空白对照组）。72h 后倒置荧光显观察荧光细胞所占比例，对转染效率进行初步判断。当荧光细胞比
【参考文献】：
期刊论文
[1]Direct modification of spermatogonial stem cells using lentivirus vectors in vivo leads to efficient generation of transgenic rats[J]. Bang-Jin Kim,Yong-Hee Kim,Myeong-Geun Oh,Ki-Jung Kim,Sang-Eun Jung,Ju-Hee Jin,Sun-Uk Kim,Kwan-Sik Min,Buom-Yong Ryu. Asian Journal of Andrology. 2019(02)
[2]自噬相关蛋白mTOR、LC3-Ⅱ及HIF-1α与PM/DM的相关性[J]. 钟勇,柴克霞. 中国高原医学与生物学杂志. 2018(04)
[3]吡格列酮对2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝大鼠肝组织SIRT1、UCP2表达的影响[J]. 李楠,徐静,成淑英,王翔,农晰婷. 山西医科大学学报. 2018(12)
[4]自噬与衰老相关性疾病[J]. 王哲,王佳贺. 实用老年医学. 2018(12)
[5]冠心病患者外周血内皮祖细胞sirtuins家族表达分析[J]. 范力宏,张卫萍,乌宇亮,王亭忠,杜媛,白晓君. 临床心血管病杂志. 2018(10)
[6]SIRT1蛋白在胃癌组织的表达及其临床病理意义[J]. 梁群英,秦珍珠,王丹. 临床医学工程. 2018(10)
[7]Transwell法检测细胞侵袭迁移能力实验中的影响因素[J]. 唐秋琳,毕锋. 实验科学与技术. 2018(04)
[8]SIRT1调节2型糖尿病代谢的研究进展[J]. 陆海英,李志杰,张悦. 生命科学. 2018(08)
[9]miR-34a通过下调SIRT1抑制乳腺癌干细胞机制研究[J]. 李晓锋,汪园园,刘希. 陕西医学杂志. 2018(06)
[10]沉默信息调节因子-1及上皮性钙黏附素在胃癌中的表达及其相关性[J]. 李明辉,赵静雅,董永杰,李玉梅,冯运章,霍双. 现代肿瘤医学. 2018(12)
硕士论文
[1]SIRT1在宫颈癌发生发展及化疗耐药中作用的初步研究[D]. 齐月雯.青岛大学 2018
本文编号：3347762
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3347762.html
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