暗纹东方鲀性别相关基因dmrt1的分离、鉴定及表达分析

发布时间：2021-08-21 03:54

　　为探究暗纹东方鲀dmrt1基因的序列和结构信息,初步研究dmrt1基因在性腺发育和性别分化过程中的作用,我们利用RACE技术成功分离出暗纹东方鲀dmrt1基因cDNA的全长序列,并对其在成鱼不同组织和幼鱼不同发育期性腺组织中的表达进行了鉴定和分析。结果表明:dmrt1基因cDNA全长1620bp（NCBI登录号:MH218816）,编码294个氨基酸,与红鳍东方鲀及星点东方鲀序列相似性最高。dmrt1基因编码的蛋白是一种不稳定的亲水性蛋白,不存在信号肽序列和跨膜区;该蛋白最可能存在于线粒体、细胞质和细胞核;Dmrt1蛋白含有45个磷酸化位点,但不含N(糖基化位点和跨膜保守结构域,二级结构以无规卷曲为主;氨基酸多重序列比对结果显示Dmrt1氨基酸序列的DM结构域在哺乳动物和鱼类中均高度保守,且近C—末端的氨基酸序列也比较保守。荧光定量PCR分析显示dmrt1基因主要在雄鱼中表达,尤其是在精巢中表达量最高,而且dmrt1在幼鱼不同发育期精巢中的表达量呈现出先降低再迅速升高的表达趋势,而相对于精巢而言,卵巢中dmrt仅有微弱表达。研究结果表明,dmrt1可能在雄性性别分化和精巢发育等过程中发... 

【文章来源】：海洋湖沼通报. 2020,(06)北大核心CSCD

【文章页数】：12 页

【部分图文】：

暗纹东方鲀dmrt1基因部分CDS(a)、5’-RACE (b)和3’-RACE (c)电泳图

通过PCR反应扩增得到491bp长度的片段(图1-a),根据获得的序列设计特异性引物,用RACE扩增出cDNA 的5’和3’序列,其中5’-RACE序列长度为684bp(图1-b),3’-RACE序列长度为967bp(图1-c),由于连接转化后的菌液进行PCR鉴定引物是通用引物M13F/M13R,因此PCR扩增产物条带长度要大于目的条带长度。将5’-RACE和3’-RACE序列拼接后得到暗纹东方鲀dmrt1基因1620bp的cDNA全长序列,包括5’非编码区23bp和3’非编码区712bp,开放阅读框885bp,编码294个氨基酸,其中28～75aa为DM结构域,第28、31、47、52、54和57位的Cys位点以及第34和43位的His位点构成C2H2C4型锌指结构,可使DNA发生二聚化并形成与其结合的回文结构(图2)。其蛋白相对分子量为31.69Ku,等电点为8.32,蛋白分子式为C1342H2109N397O445S24,总原子数为4317。成熟蛋白质中含有带负电荷的酸性氨基酸(Asp+Glu)和带正电荷的碱性氨基酸(Arg+Lys)分别为22和26个。摩尔消光系数为22765,不稳定系数为61.72,属于不稳定蛋白。总平均疏水指数GRAVY(Grand average of hydropathicity)为-0.556,属于亲水性蛋白(图3)。图3 暗纹东方鲀Dmrt1蛋白的疏水性分析图

暗纹东方鲀Dmrt1蛋白的疏水性分析图

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：3354823