两个大豆肌醇半乳糖苷合成酶基因的原核诱导表达

发布时间：2021-08-23 14:52

　　肌醇半乳糖苷合成酶（GolS）是棉子糖系列寡糖（RFOs）生物合成途径中的关键酶,在植物应对非生物胁迫过程中发挥重要作用。本研究通过RT-PCR从大豆叶片cDNA中扩增获得编码GolS的GmGolS2-1和GmGolS2-3基因。添加酶切位点EcoRⅠ和SalⅠ,将GmGolS2-1和GmGolS2-3分别连入原核表达载体pET28中,转化大肠杆菌Rosetta（DE3）,进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳分析诱导浓度和诱导时间对蛋白表达的影响。结果表明:在诱导时间为3h,IPTG浓度为0.1mmol·L^-1时,可获得大量GmGolS2-1和GmGolS2-3的重组蛋白,分子量均大约为40kD。 

【文章来源】：黑龙江农业科学. 2020,(08)

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

GmGolS2-1和GmGolS2-3PCR扩增和质粒双酶切

为了获得GmGolS2-1和GmGolS2-3的原核表达蛋白，对IPTG的浓度和诱导时间进行了优化。图3是GmGolS2-1的IPTG不同诱导时间结果，3-8号泳道与对照（孔道1为空载体、孔道2为未诱导菌体）相比，在大概40kD处有目的蛋白的表达。图4是GmGolS2-3的IPTG不同诱导时间结果，3-8号泳道与对照（孔道1为空载体、孔道2为未诱导菌体）相比，在大概40kD处有目的蛋白的表达。GmGolS2-1和GmGolS2-3蛋白分子量大小分别为38.05和38.1kD，加上组氨酸标签之后的融合蛋白大小均约为40kD，因此表达的蛋白大小均与预期结果相符，且在对照中均无此蛋白的表达。表明GmGolS2-1和GmGolS2-3基因已经在大肠杆菌中成功表达。如图3和图4所示，在IPTG诱导1h时均已出现重组蛋白，随着诱导时间的延长，重组蛋白的表达量随之增加，到3h时GmGolS2-1和GmGolS2-3的表达量均达到最大值，之后差别不大。所以后续试验IPTG的诱导时间均设为3h。图3 GmGolS2-1原核表达诱导时间优化

GmGolS2-1原核表达诱导时间优化

【参考文献】：
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硕士论文
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本文编号：3358077