甘薯SPW5基因克
发布时间：2021-08-24 23:05
近年来,由于生产水平的提高和农业产业结构的优化,以及人们膳食结构的调整,甘薯（Ipomoea batatas L.）作为重要的粮食、饲料、工业原料及新能源,种植的面积日益加大,人们对甘薯的需求也日益增高。甘薯是一种无性繁殖作物,极易在代代繁殖中累积病毒,从而导致产量大减,品质变差。深入研究甘薯抗病机制,可以为甘薯的优质育种提供依据。本实验室前期通过转录组数据分析,筛选出一些与甘薯抗病毒病相关的基因,其中包括SPW5基因。本研究从甘薯品种徐薯22中克隆出了SPW5基因,并对其核苷酸序列进行了分析,证明SPW5属于WRKY转录因子,成功构建了该基因过表达载体SPW5-p101-GV3101。对甘薯的再生体系进行了探索:以无菌试管苗为材料,分别将4个甘薯品种的茎尖、叶片、叶柄、侧芽作为外植体建立再生体系,并对离体再生培养基进行了优化,成功诱导出愈伤组织,并进行悬浮培养,成功诱导出体细胞胚。并且对农杆菌介导的SPW5基因表达载体遗传转化体系进行了探索。主要研究结果如下:1.基因克隆及载体构建:根据转录组测序得到的序列设计SPW5基因引物,从甘薯品种徐薯22中克隆了SPW5基因CDS序列。然后利...
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
WRKY转录因子参与植物逆境胁迫应答作用模式图
第 2 章 甘薯 SPW5 基因克隆及生物信息学分析设计，正向引物和反向引物分别是 F：5’-cgcagcagcccagccaagaaagatatatga-3’，R3’-atggagaacaaatttgatgacctcatcat-5’，预计克隆的基因片段为 1182bp，PCR 扩增产进行 1%琼脂糖凝胶电泳检测(图 2-1a)，扩增后产物连接 TOPO-pENTR 载体，转大肠杆菌感受态 DH5 ，涂 LB+Kan 抗性平板，37°C 培养 13-16h 出现单菌落，择 12 个单菌落在 LB+Kan 液体培养基中摇菌，200r/min 过夜培养，然后采用扩引物进行 PCR 检测(图 2-1b)并送测序。电泳检测与目的片段大小相同，测序结序列与目的序列对比相同，则表明成功克隆了该基因。
18图 2-2 SPW5 氨基酸序列Figure 2-2 Amino acid sequence of SPW5红色方框表示 WRKY 基序2.4.2.2 氨基酸的预测分析(1)氨基酸理化性质的分析：将甘薯 SPW5 的氨基酸序列输入 Expasy 网站中进行预测其理化性质，结果表明 SPW5 基因编码的蛋白质分子量为 43301.21Da；分子式为 C1896H2963N527O613S11，原子总数为 6010；等电点 pI 为 6.36，共编码 393 个氨基酸；其中带负电荷的残基总数(Asp + Glu)为 41；带正电荷的残基总数(Arg + Lys)
【参考文献】：
期刊论文
[1]Micro-Tom番茄转基因植株再生体系的优化[J]. 邱实,张文举,许馥慧,邓志瑞. 上海大学学报(自然科学版). 2018(02)
[2]病原菌诱发的植物先天免疫研究进展[J]. 严霞,牛晓磊,陶均. 分子植物育种. 2018(03)
[3]甘薯茎腐病症状及其病原鉴定[J]. 沈肖玲,林钗,钱俊婷,仇智灵,陈江彬,孙超,易建平,楼兵干. 植物病理学报. 2018(01)
[4]AtSARK关键自磷酸化位点Tyr-350的点突变及其功能分析[J]. 龚雅茹,郭朝霞,王丹,梅圆圆,王宁宁. 植物生理学报. 2017(01)
[5]玉米PDE191基因全长cDNA的克隆及其生物信息学分析[J]. 熊伟,刘久东,杨飞,孙美涛,张海洋. 井冈山大学学报(自然科学版). 2016(05)
[6]重庆市甘薯病毒病种类及为害[J]. 罗勇,傅玉凡,曾令玲,魏文均. 植物医生. 2015(06)
[7]甘薯抗病基因的相关研究[J]. 赵琳,詹生华. 农业科技通讯. 2015(11)
[8]甘薯病毒病[J]. 黄艳岚. 湖南农业. 2015(11)
[9]甘薯悬浮细胞系的建立及对抗草甘膦基因的遗传转化[J]. 张聪,蒲志刚,张婷,李明,屈会娟,谭文芳,杨松涛,王大一,阎文昭. 西南农业学报. 2015(01)
[10]甘薯新品种吉徐薯2号的选育及栽培技术[J]. 王凤,刘峰,王忠伟,王洋,张海,李闯. 辽宁农业科学. 2014(05)
博士论文
[1]纳米甘薯渣纤维素降血糖血脂的功效及其分子机理的研究[D]. 陆红佳.西南大学 2015
[2]基于发根体系的甘薯茎线虫病研究及甘薯遗传转化体系建立[D]. 阮龙.安徽农业大学 2007
硕士论文
[1]特异表达甘薯蔗糖转运蛋白基因IbSUT对烟草淀粉合成的影响[D]. 李倩.电子科技大学 2014
本文编号：3360895
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
WRKY转录因子参与植物逆境胁迫应答作用模式图
第 2 章 甘薯 SPW5 基因克隆及生物信息学分析设计，正向引物和反向引物分别是 F：5’-cgcagcagcccagccaagaaagatatatga-3’，R3’-atggagaacaaatttgatgacctcatcat-5’，预计克隆的基因片段为 1182bp，PCR 扩增产进行 1%琼脂糖凝胶电泳检测(图 2-1a)，扩增后产物连接 TOPO-pENTR 载体，转大肠杆菌感受态 DH5 ，涂 LB+Kan 抗性平板，37°C 培养 13-16h 出现单菌落，择 12 个单菌落在 LB+Kan 液体培养基中摇菌，200r/min 过夜培养，然后采用扩引物进行 PCR 检测(图 2-1b)并送测序。电泳检测与目的片段大小相同，测序结序列与目的序列对比相同，则表明成功克隆了该基因。
18图 2-2 SPW5 氨基酸序列Figure 2-2 Amino acid sequence of SPW5红色方框表示 WRKY 基序2.4.2.2 氨基酸的预测分析(1)氨基酸理化性质的分析：将甘薯 SPW5 的氨基酸序列输入 Expasy 网站中进行预测其理化性质，结果表明 SPW5 基因编码的蛋白质分子量为 43301.21Da；分子式为 C1896H2963N527O613S11，原子总数为 6010；等电点 pI 为 6.36，共编码 393 个氨基酸；其中带负电荷的残基总数(Asp + Glu)为 41；带正电荷的残基总数(Arg + Lys)
【参考文献】：
期刊论文
[1]Micro-Tom番茄转基因植株再生体系的优化[J]. 邱实,张文举,许馥慧,邓志瑞. 上海大学学报(自然科学版). 2018(02)
[2]病原菌诱发的植物先天免疫研究进展[J]. 严霞,牛晓磊,陶均. 分子植物育种. 2018(03)
[3]甘薯茎腐病症状及其病原鉴定[J]. 沈肖玲,林钗,钱俊婷,仇智灵,陈江彬,孙超,易建平,楼兵干. 植物病理学报. 2018(01)
[4]AtSARK关键自磷酸化位点Tyr-350的点突变及其功能分析[J]. 龚雅茹,郭朝霞,王丹,梅圆圆,王宁宁. 植物生理学报. 2017(01)
[5]玉米PDE191基因全长cDNA的克隆及其生物信息学分析[J]. 熊伟,刘久东,杨飞,孙美涛,张海洋. 井冈山大学学报(自然科学版). 2016(05)
[6]重庆市甘薯病毒病种类及为害[J]. 罗勇,傅玉凡,曾令玲,魏文均. 植物医生. 2015(06)
[7]甘薯抗病基因的相关研究[J]. 赵琳,詹生华. 农业科技通讯. 2015(11)
[8]甘薯病毒病[J]. 黄艳岚. 湖南农业. 2015(11)
[9]甘薯悬浮细胞系的建立及对抗草甘膦基因的遗传转化[J]. 张聪,蒲志刚,张婷,李明,屈会娟,谭文芳,杨松涛,王大一,阎文昭. 西南农业学报. 2015(01)
[10]甘薯新品种吉徐薯2号的选育及栽培技术[J]. 王凤,刘峰,王忠伟,王洋,张海,李闯. 辽宁农业科学. 2014(05)
博士论文
[1]纳米甘薯渣纤维素降血糖血脂的功效及其分子机理的研究[D]. 陆红佳.西南大学 2015
[2]基于发根体系的甘薯茎线虫病研究及甘薯遗传转化体系建立[D]. 阮龙.安徽农业大学 2007
硕士论文
[1]特异表达甘薯蔗糖转运蛋白基因IbSUT对烟草淀粉合成的影响[D]. 李倩.电子科技大学 2014
本文编号：3360895
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