高粱抗病基因SbSGT1的克隆及原核表达

发布时间：2021-08-26 23:14

　　为探究高粱抗病基因SbSGT1的功能,以高粱BTx623为材料,利用RNA反转录得cDNA,以cDNA为模板扩增出全长SbSGT1基因,并对其进行生物信息学分析。进一步构建pET-28a-SbSGT1重组质粒进行原核表达,并分别对表达菌株、诱导温度以及异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导浓度进行了优化。结果表明,SbSGT1全长1 095 bp,编码364个氨基酸,蛋白理论分子大小约为40.45 kDa,蛋白质等电点为5.0。进化树分析表明,SbSGT1与玉米和水稻的亲缘性较高;蛋白质序列分析表明,SbSGT1蛋白为亲水性蛋白,定位在细胞质中;二级结构预测发现其α螺旋和无规则卷曲占比最高,分别达到43.41%和45.88%。原核表达结果表明,SbSGT1最佳表达菌株为大肠杆菌BL21（DE3）,最佳诱导温度和IPTG浓度分别为25℃和0.8 mmol·L^-1。本研究为进一步探究SbSGT1基因在高粱抗病机理中所发挥的生物学功能奠定了基础。 

【文章来源】：核农学报. 2020,34(09)北大核心CSCD

【文章页数】：10 页

【部分图文】：

SbSGT1蛋白跨膜区预测

以高粱BTx623幼苗总RNA反转录的cDNA为模板,以高粱基因组数据库(https://phytozome)的SbSGT1基因序列为参考,用Primer Premier 5.0设计的SbSGT1-F/SbSGT1-R引物对进行PCR扩增,扩增得到序列为1 095 bp的目的基因,共编码 364个氨基酸。采用1%琼脂糖凝胶电泳对获得的PCR产物进行检测,得到的条带大小与数据库中的一致(图1)。2.2 生物信息学分析

在NCBI比对下载SGT1在其他物种的同源序列,与高粱SbSGT1进行序列同源性分析。由图2可知,SbSGT1与玉米(Zea mays)同源性为94.87%,与水稻(Oryza sativa)的同源性为85.75%,与大麦(Hordeum vulgare)的同源性为83.24%,与小麦(Triticum aestivum)的同源性为81.82%,说明SGT1在这几种植物中都相对保守。2.2.2 SbSGT1基因系统进化树分析


本文编号：3365147