V-ATPase基因家族调控SREBPs入核及功能的作用机制

发布时间：2021-08-27 12:32

　　目的胆固醇调节元件结合蛋白（SREBPs）是调控脂类代谢的重要转录因子,其与代谢性疾病密切相关。V-ATPase作为持家基因,通过全酶的聚集和解离调节酶的活性。目前尚未有关于V-ATPase及其所在通路调控SREBP的相关报道。方法构建基因重组质粒,PCR法扩增V-ATPase基因片段,并将其插入表达载体pcDNA3.1质粒,构建基因重组质粒pcDNA3.1-V-ATPase,将目的质粒pcDNA3.1-V-ATPase及对照质粒pcDNA3.1分别转染大鼠肾小球系膜细胞。采用WesternBlotting、q-PCR、荧光显微观察等方法研究V-ATPase和SREBPs的关系。结果发现V-ATPase功能缺失抑制大鼠肾小球系膜细胞脂肪积累,V-ATPase调控SREBP的功能具有保守性,V-ATPase调控SREBP-1的入核不依赖于泛素化降解,V-ATPase调控SREBP-1的核积累依赖于溶酶体的pH值。结论上述结果说明V-ATPase是新的调控SBP-1的基因。这为寻找新的调控SREBP的因子,并研究其调控脂质代谢的作用机制提供了依据。 

【文章来源】：解剖学研究. 2020,42(05)

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

气相色谱检测脂肪酸成分的变化

通过二甲基亚砜（DMSO）和V-ATPase特异性抑制剂（Bafilomycin A1）做比较可得出如下内容：SREBP、V-ATPase组织及布局一般认为不易变化，通过应用Bafilomycin A1作用于大鼠肾小球系膜细胞，经过Western blot和Filipin染色检验SREBP相关p SREBP及n SREBP中成分的量和细胞脂肪成分的变动。应用BafilomycinA1后，促使SREBP更多地集结于胞核。含量较少的BafilomycinA1使SREBP增多；BafilomycinA1使SREBP明显降低。SREBP、V-ATPase组织及布局不易变化的观点得以证实，由实验可知，胆固醇的位置发生明显改变，这是V-ATPase调控其运输的结果。由于胞内体的酸化受阻，导致受体无法与配体分离，因此受体和配体以及细胞膜上的胆固醇被同时阻断在细胞质中（图3）。2.4 V-ATPase调控SREBP-1的入核不依赖于泛素化降解，依赖于溶解酶体的PH值

SREBP-1在核内的聚集。由于核内的SREBP-1降解途径是依赖于泛素化-蛋白酶体体系的，所以为了检测是不是由于SREBP-1的降解出现了问题进而导致其核内的积累，我们用V-ATPase另一种特异性抑制剂（MG132）和BafilomycinA1分别抑制蛋白酶体和V-ATPase的活性，结果显示：当MG132存在时，加入BafilomycinA1仍然能够促进SREBP-1在细胞核内聚集，而且二者导致的nSREBP-1增加具有叠加效应。V-ATPase和溶酶体、高尔基体中p H值的稳定密切相关，溶酶体pH值小于7的状态为维续细胞正常功能的根本，V-ATPase活性降低和溶酶体的酸性环境的维持以及甘油三酯及胆固醇运送密切相关。通过正丙胺的作用抑制溶酶体的酸性内环境，可知，V-ATPas节制SREBP-1和溶酶体的pH值的稳定密切相关（图4）。3 讨论


本文编号：3366359