拟南芥PLT2互作蛋白/基因筛选和WOX5功能研究
发布时间：2021-09-02 14:18
植物干细胞是植物胚后发育形成各种组织器官的细胞来源和信号调控中心。拟南芥根尖干细胞受PLTs和WOX5等转录因子的调控。PLT2蛋白在QC和干细胞中大量积累,过量表达PLT2基因使根分生组织变长;WOX5基因在静止中心细胞特异性表达,在维持周围的干细胞的特性中起重要作用,WOX5过量表达可抑制柱干细胞的分化。为进一步了解植物根尖干细胞调控的分子机理,本研究主要通过酵母双杂交筛选PLT2相互作用蛋白以及对plt1plt2突变体进行EMS诱变,筛选短根恢复突变体,并进一步探究了WOX5基因过量表达对拟南芥生长发育的影响。主要研究结果如下:1、构建pGBKT7-PLT2诱饵表达载体,利用营养缺陷型培养基筛选cDNA文库,共筛选出6个与PLT2相互作用的蛋白,采用酵母双杂交和BIFC技术验证了其中两个蛋白（HSP20和DJA6）与PLT2之间的相互作用,表达分析发现HSP20和DJA6在根尖和茎尖分生组织中表达,暗示HSP20和DJA6有可能参与根尖和茎尖干细胞调控。2、从EMS诱变的plt1plt2突变体库中筛选到了能部分恢复plt1plt2根生长缺陷的突变体,初步表型分析发现它们的根尖分生...
【文章来源】：重庆师范大学重庆市
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
拟南芥根尖结构图(引自Leeetal.,2013)
母双杂交技术利用酵母转录激活作用原理，转录活化蛋白能够与特而启动相应基因的转录表达[71]。目前酵母双杂交实验普遍采用 G这种 DNA 结合与转录激活的功能是由两个不同的结构域分别来完活因子 GAl4 由 DNA 结合结构域(Binding Domain，BD)和 DNA 转(Activation Domain，AD)组成，BD 能够识别 DNA 上的特异序列位在调控基因上游，从而激活调控基因的转录[72]。在利用 GAL4 系文库或研究蛋白与蛋白间互作时，靶蛋白(“诱饵”)与 DNA 结合结构，转录激活结构域与文库蛋白或要验证的蛋白相结合[73]。一般情D 能够与 GAL4 上游 UAS 序列结合但是不能进行转录，单独的 其功能，所以，只有两者在物理空间上相互靠近时才再现转录因UAS 结合并激活报道基因的转录。AH109 酵母菌中，通过基因工L4/UAS 系统的启动子下游构建了 ADE2(Adenine 2)，HIS3(Histi或 LacZ)报道基因，所以，在实验操作过程中可以通过营养缺陷的选或验证两个蛋白之间是否存在相互作用。
重庆师范大学硕士学位论文 2 材料与方法2 材料与方法2.1 材料2.1.1 植物材料拟南芥 Columbia(Col-0)、plt1plt2 和 MiR160，这些材料均由本实验保存。2.1.2 菌株和质粒菌株：DH5α (Escherichia coli) 菌株购自 TaKaRa 公司；根癌农杆菌LBA4404(Agrobacteriumtumefaciens)菌株购天根生化科技(北京)有限公司；AH109酵母菌株由本实验室保存。质粒：pMD19-T 载体购自 TaKaRa 公司；载体 pFPL-GUS-GFP 由本实验室改造；酵母质粒 pGBKT7、pGADT7(图 2.1)、pGBKT7-53、pGBKT7-Lam 和pGADT7-T 由本实验室保存；1300-SPYCE 和 1300-SPYNE 由本实验室保存。
【参考文献】：
期刊论文
[1]生长素与植物根尖干细胞巢的维持[J]. 张倩倩,郑童,予茜,葛磊. 植物学报. 2018(01)
[2]ARF2 coordinates with PLETHORAs and PINs to orchestrate ABA-mediated root meristem activity in Arabidopsis[J]. Sujittra Promchuea,Yujuan Zhu,Zhizhong Chen,Jing Zhang,Zhizhong Gong. Journal of Integrative Plant Biology. 2017(01)
[3]植物干细胞研究进展[J]. 田奇琳,赖钟雄. 园艺与种苗. 2013(08)
[4]植物根尖干细胞微环境的遗传调控[J]. 徐庞连,阳成伟,李春鑫,袁东柯. 华南师范大学学报(自然科学版). 2013(02)
[5]植物根尖分生组织干细胞调控模式[J]. 陈金慧,王鹏凯,张艳娟,施季森. 南京林业大学学报(自然科学版). 2012(04)
[6]植物干细胞研究进展[J]. 王德信. 安徽农业科学. 2012(20)
[7]拟南芥抗盐突变体筛选中盐浓度的确定[J]. 赵佳,蒋春云,沈晓艳. 现代农业科技. 2010(23)
[8]大规模酵母双杂交技术研究蛋白质相互作用的应用[J]. 吴志豪,王建,贺福初. 遗传. 2006(12)
[9]酵母双杂交技术的发展[J]. 朱静仪. 中山大学研究生学刊(自然科学、医学版). 2002(02)
博士论文
[1]两组类受体激酶调控拟南芥根生长发育的分子机理[D]. 欧洋.兰州大学 2017
[2]ABO8参与ABA介导的线粒体活性氧信号调控拟南芥根生长[D]. 杨丽.中国农业大学 2014
[3]细胞分裂素和生长素调控拟南芥体细胞胚根端分生组织建立的分子基础[D]. 刘玉博.山东农业大学 2011
[4]拟南芥体细胞胚胎发生的机理研究[D]. 苏英华.山东农业大学 2008
硕士论文
[1]利用酵母双杂交系统筛选家蚕BR-C转录因子的相互作用蛋白[D]. 王永虎.西南大学 2013
本文编号：3379166
【文章来源】：重庆师范大学重庆市
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
拟南芥根尖结构图(引自Leeetal.,2013)
母双杂交技术利用酵母转录激活作用原理，转录活化蛋白能够与特而启动相应基因的转录表达[71]。目前酵母双杂交实验普遍采用 G这种 DNA 结合与转录激活的功能是由两个不同的结构域分别来完活因子 GAl4 由 DNA 结合结构域(Binding Domain，BD)和 DNA 转(Activation Domain，AD)组成，BD 能够识别 DNA 上的特异序列位在调控基因上游，从而激活调控基因的转录[72]。在利用 GAL4 系文库或研究蛋白与蛋白间互作时，靶蛋白(“诱饵”)与 DNA 结合结构，转录激活结构域与文库蛋白或要验证的蛋白相结合[73]。一般情D 能够与 GAL4 上游 UAS 序列结合但是不能进行转录，单独的 其功能，所以，只有两者在物理空间上相互靠近时才再现转录因UAS 结合并激活报道基因的转录。AH109 酵母菌中，通过基因工L4/UAS 系统的启动子下游构建了 ADE2(Adenine 2)，HIS3(Histi或 LacZ)报道基因，所以，在实验操作过程中可以通过营养缺陷的选或验证两个蛋白之间是否存在相互作用。
重庆师范大学硕士学位论文 2 材料与方法2 材料与方法2.1 材料2.1.1 植物材料拟南芥 Columbia(Col-0)、plt1plt2 和 MiR160，这些材料均由本实验保存。2.1.2 菌株和质粒菌株：DH5α (Escherichia coli) 菌株购自 TaKaRa 公司；根癌农杆菌LBA4404(Agrobacteriumtumefaciens)菌株购天根生化科技(北京)有限公司；AH109酵母菌株由本实验室保存。质粒：pMD19-T 载体购自 TaKaRa 公司；载体 pFPL-GUS-GFP 由本实验室改造；酵母质粒 pGBKT7、pGADT7(图 2.1)、pGBKT7-53、pGBKT7-Lam 和pGADT7-T 由本实验室保存；1300-SPYCE 和 1300-SPYNE 由本实验室保存。
【参考文献】：
期刊论文
[1]生长素与植物根尖干细胞巢的维持[J]. 张倩倩,郑童,予茜,葛磊. 植物学报. 2018(01)
[2]ARF2 coordinates with PLETHORAs and PINs to orchestrate ABA-mediated root meristem activity in Arabidopsis[J]. Sujittra Promchuea,Yujuan Zhu,Zhizhong Chen,Jing Zhang,Zhizhong Gong. Journal of Integrative Plant Biology. 2017(01)
[3]植物干细胞研究进展[J]. 田奇琳,赖钟雄. 园艺与种苗. 2013(08)
[4]植物根尖干细胞微环境的遗传调控[J]. 徐庞连,阳成伟,李春鑫,袁东柯. 华南师范大学学报(自然科学版). 2013(02)
[5]植物根尖分生组织干细胞调控模式[J]. 陈金慧,王鹏凯,张艳娟,施季森. 南京林业大学学报(自然科学版). 2012(04)
[6]植物干细胞研究进展[J]. 王德信. 安徽农业科学. 2012(20)
[7]拟南芥抗盐突变体筛选中盐浓度的确定[J]. 赵佳,蒋春云,沈晓艳. 现代农业科技. 2010(23)
[8]大规模酵母双杂交技术研究蛋白质相互作用的应用[J]. 吴志豪,王建,贺福初. 遗传. 2006(12)
[9]酵母双杂交技术的发展[J]. 朱静仪. 中山大学研究生学刊(自然科学、医学版). 2002(02)
博士论文
[1]两组类受体激酶调控拟南芥根生长发育的分子机理[D]. 欧洋.兰州大学 2017
[2]ABO8参与ABA介导的线粒体活性氧信号调控拟南芥根生长[D]. 杨丽.中国农业大学 2014
[3]细胞分裂素和生长素调控拟南芥体细胞胚根端分生组织建立的分子基础[D]. 刘玉博.山东农业大学 2011
[4]拟南芥体细胞胚胎发生的机理研究[D]. 苏英华.山东农业大学 2008
硕士论文
[1]利用酵母双杂交系统筛选家蚕BR-C转录因子的相互作用蛋白[D]. 王永虎.西南大学 2013
本文编号：3379166
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3379166.html
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