葡萄酒植物乳杆菌SA-680耐酸标记基因的功能研究

发布时间：2021-09-03 22:46

　　植物乳杆菌是葡萄酒苹果酸-乳酸发酵过程中一类具有增香酿造潜力的乳酸菌,然而多数植物乳杆菌不能够耐受葡萄酒酸性环境。因此,研究优良植物然乳杆菌的潜在耐酸基因,解析其在酸胁迫条件下的生理功能对揭示苹果酸-乳酸发酵过程中的微生物种群演变规律以及生产实践都有着重要的指导意义。本研究以从葡萄酒中分离的优良植物乳杆菌XJ25为试验材料,以SA-680耐酸标记基因为研究对象,采用基因敲除的方式对植物乳杆菌SA-680耐酸标记基因的生物学功能进行解析,主要的研究结果如下:（1）甲基化修饰作用是影响敲除质粒p LCNICK电转化植物乳杆菌XJ25的主要原因;感受态细胞收集时间为OD600=0.2时的电转化效率最高,达到1.83×105 CFU/μg DNA;在一定范围内,植物乳杆菌XJ25电转化效率随着电场强度的增加而升高,在达到峰值（2.08×105 CFU/μg DNA）后下降;植物乳杆菌XJ25电转化效率与质粒浓度呈现负相关的趋势,但与电击次数不相关。（2）通过重叠延伸PCR技术和多片段一步克隆技术构建了带有不同sg RNA的靶基因敲除载体p LCNICK-△mdt-sg RNA1和p LCNIC... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

酒酒球菌MLF的代谢路径(Betteridgeetal.2015)

本研究技术路线

结果在红霉素抗性平皿上出现了大量转化子（如图2-1）。在这一组试验中，感受态细胞收集时间为 OD600=0.3，电转化时的质粒加量为40 ng（稀释于 10 μL 电击缓冲液），电击时的电场强度为 10 kV/cm，电击两次。图 2-1 质粒甲基化修饰对植物乳杆菌 XJ25电转化的影响Fig. 2-1 Effect of plasmid methylation on the electrotransformation efficiency of L. plantarum XJ25由图 2-1 可以看出，甲基化修饰的质粒 pLCNICK 在电转化植物乳杆菌 XJ25 后只能在红霉素抗性平皿上长出数量非常少的单菌落，三个板上的数量分别为 2，8


本文编号：3382014