HSV-TK/CD20双自杀基因载体的构建及其对T细胞杀伤作用的研究

发布时间：2021-09-05 20:56

　　TCR-T和CAR-T细胞作为一种新型细胞药物,当前已在肿瘤过继免疫治疗（adoptive cell therapy,ACT）临床试验中大量应用。其在体外对患者T细胞进行基因修饰,使之成为具有新特性功能的自体细胞药物,再回输至患者体内,从而实现对肿瘤细胞的特异性杀伤。然而,这种治疗方式在发挥作用的同时可能出现不良反应,目前临床已经观察到TCR-T和CAR-T在治疗过程中可能会出现细胞因子风暴、非肿瘤靶向的脱靶效应等不良反应。同时由于细胞药物在体内具有增殖能力,不像传统治疗药物在体内会被代谢降解,因此其在体内发生不良反应的程度不可预估。如果细胞药物在人体内具有人为可控的自杀基因安全开关,则无疑加大了其在临床使用中的安全性与可控性。HSV-TK是一种单纯疱疹病毒型胸苷激酶,前药更昔洛韦（ganciclovir,GCV）与之结合后产生的三磷酸产物可抑制细胞DNA复制,从而诱导细胞凋亡,可作为自杀基因。但HSV-TK完全发挥作用时间较长,需72 h,且药物GCV使用存在局限性。同时,HSV-TK是一种胞内蛋白,将其导入细胞后无法直接对阳性细胞进行筛选,因此需要共同连接一个胞外蛋白作为筛选标记。... 

【文章来源】：西南交通大学四川省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

CAR-T治疗的副反应[12]

图 1-1 CAR-T 治疗的副反应[12]1.2 自杀基因研究现状自杀基因技术是通过基因工程技术使细胞携带自杀基因，通过口服或静脉输注的方式给予外源药物，使基因修饰的细胞在药物作用下进行自我清除的一种策略（图 1-2）。将自杀基因预先导入过继免疫疗法使用的细胞药物中，可使其在发生脱靶反应等不良反应时进行自我清除，防止正常细胞或组织受到损伤，从而保证过继免疫治疗的安全性[15]。自杀基因的作用机制主要分为三种：代谢型、二聚化结构诱导型、单克隆抗体介导型[16]。研究中常用的自杀基因包括单纯疱疹病毒型胸苷激酶（herpes simplex virusthymidine kinase，HSV-TK）基因、可诱导的 Caspase9（inducible Caspase9，iCasp9）[17,18]、CD20[19]、可诱导的 FAS（inducible FAS，iFas）[20]、 c-myc[21]， EGFR[22]等。

西南交通大学硕士研究生学位论文 -TK酶（thymidine kinase，TK）存在于哺乳动物细胞、疱疹病毒、病毒型胸苷激酶 HSV-TK 对特定核苷类似物的亲和力是哺乳动4]，因此其基因可作为自杀基因应用于哺乳动物细胞中。1986 年 HSV-TK 对前药更昔洛韦（ganciclovir，GCV）敏感，并验证了 H细胞的杀伤作用。HSV-TK 为胞内蛋白，在加入脱氧鸟苷酸类似K 可使 GCV 磷酸化为有毒的三磷酸化产物，成为 dGTP 的竞配，抑制 DNA 链延长，进而导致细胞死亡[15]（图 1-3）。因此，期依赖性自杀基因，只有被转染的细胞在增殖状态下才对前药除目的[26]。

【参考文献】：
期刊论文
[1]嵌合抗原受体T细胞疗法的不良反应与治疗[J]. 胡冠华,曾慧敏,张乐萍.  临床儿科杂志. 2017(05)
[2]基于2A肽策略构建多基因表达载体的研究进展[J]. 张欢,黄思超,蔡绍晖.  中国生物工程杂志. 2013(01)
[3]CD20分子与靶向治疗[J]. 刘银星,杨纯正.  生命的化学. 2003(01)



本文编号：3386073