苹果MdbZIP26基因表达模式及其启动子的功能分析
发布时间：2021-09-05 21:35
苹果在我国水果产业中占据重要地位,但在其生长过程中不可避免的受到干旱和盐胁迫等逆境因素的影响。据报道,bZIP家族转录因子与非生物胁迫密切相关。课题组前期已对苹果MdbZIP26基因进行初步功能研究,结果表明该基因可能通过ABA介导的信号转导途径来提高植物对干旱和盐胁迫的抗性。为了进一步阐明MdbZIP26基因的功能以及对非生物胁迫的响应机制。本文对MdbZIP26基因进行亚细胞定位和自激活活性验证,对其转录后潜在的磷酸化修饰位点进行预测分析。利用实时定量PCR法分析MdbZIP26的组织表达模式。同时,从富士苹果叶片中分离MdbZIP26基因启动子,将其与pCanbia1391Z-GUS载体连接后遗传转化拟南芥植株,进一步分析MdbZIP26在时间和空间上的表达模式。此外,利用生物信息学技术分析MdbZIP26启动子区的顺式作用元件,并对MdbZIP26启动子进行缺失表达分析。获得的主要结果如下:1、MdbZIP26亚细胞定位结果表明MdbZIP26定位于细胞核中。酵母自激活活性验证结果显示MdbZIP26具有转录自激活活性,但其自激活活性能够被200ng/ml的AbA抑制。说明Md...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
MdbZIP26亚细胞定位分析
图3-3 MdbZIP26自激活载体构建A，1: 1296bp 的 MdbZIP26克隆片段, M: 2000bp marker ；B，1: p GBKT7原质粒,2:EcoRI/BamHI双酶切p GBKT7, M: 15000bp marker；C，1: EcoRI/BamHI双酶切p GEM-T-MdbZIP26；D，1-8： 含MdbZIP26–BD的大肠杆菌的菌液PCR鉴定Figure 3-3 MdbZIP26 self-activation vector constructionA, 1296 bp fragment of MdbZIP26, M: 2000 bp marker; B,1: pGBKT7 original plasmid, 2:EcoRI/BamHI double digestion pGBKT7, M: 15000 bp marker; C,1: EcoRI/BamHI double digestion pGEM-T-MdbZIP26–BD; D, 1-8: PCR results of E. coli containing MdbZIP26–BD3.2.2 MdbZIP26 基因自激活活性鉴定将两个已知具有互作关系的 pGBKT7-P53 和 pGADT7-T7 分别转化于酵母 Y2H和 Y187，并共同涂于含有 SD-Leu-Trp 和 SD-Leu-Trp / x-α-gal / AbA 的培养皿中，其结果如图3-4所示，pGBKT7-P53 和 pGADT7-T7 具有互作关系在 SD-Leu-Trp/x-α-ga / AbA 的平板上生长的菌落显示蓝色，其对 AbA 具有抗性，说明载体的功能正常可用于自激活实验。之后，对 MdbZIP26 的自激活活性进行验证，将重组后的 pGBKT7
图3-4 MdbZIP26 酵母自激活活性分析Figure 3-4 Analysis of yeast self-activation activity of MdbZIP263.3 MdbZIP26 基因转录后潜在磷酸化位点预测之前研究表明 bZIP 转录因子的磷酸化修饰，对其活性激活以及功能都起很大的作用。对此，根据已知的 bZIP 同源基因的磷酸化位点，通过与拟南芥 AREB1、AREB2、AREB3、番茄 SlABRE 和大豆 GmAREB 进行氨基酸序列比对，对 MdbZIP26 潜在的磷酸化位点进行预测。结果如图3-5所示，在 MdbZIP26 中，除 bZIP 结构域外，还含有四个保守结构域 C1、C2、C3和C4。这些保守结构域中含有可能被丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶磷酸化的靶序列。不同的激酶和识别修饰不同的位点，如共有的序列R / KXXS/T可能是钙依赖蛋白激酶磷酸化的作用位点，RyXXSyT 可能被酪蛋白激酶II磷酸化，SyTXKyT 可能被蛋白激酶C磷酸化，KyRXXXSyT 可能被环鸟甘酸依赖蛋白激酶磷酸化等。
【参考文献】：
期刊论文
[1]干旱对植物影响的研究进展[J]. 王静,康林玉,刘周斌,吕俊恒,刘宇华,邹学校. 湖南农业科学. 2017(07)
[2]植物诱导型启动子研究进展[J]. 孙芳芳,宋洪元. 南方园艺. 2014(02)
[3]高等植物转录因子研究进展[J]. 陈霞,罗世巧,段翠芳,曾日中. 安徽农学通报. 2008(09)
[4]植物基因在转录水平上的调控及其生物学意义[J]. 张椿雨,龙艳,冯吉,孟金陵. 遗传. 2007(07)
[5]植物转录因子的结构与功能[J]. 陈丽. 植物生理学通讯. 1997(06)
博士论文
[1]苹果MdMYB88和MdMYB124转录因子在低温和干旱胁迫中的作用机理研究[D]. 谢银鹏.西北农林科技大学 2018
[2]茶树bZIP家族基因的非生物胁迫响应及C亚家族CsbZIP6和CsbZIP4的功能初步分析[D]. 曹红利.中国农业科学院 2016
[3]苹果HMGR基因家族启动子的克隆及功能分析[D]. 吕东梅.山东农业大学 2016
[4]拟南芥转录因子TGA7参与植物响应干旱胁迫的机制研究[D]. 吴娟娟.中国农业大学 2014
硕士论文
[1]苹果转录因子MdbZIP26基因的抗逆功能研究[D]. 王雅琼.西北农林科技大学 2018
本文编号：3386126
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
MdbZIP26亚细胞定位分析
图3-3 MdbZIP26自激活载体构建A，1: 1296bp 的 MdbZIP26克隆片段, M: 2000bp marker ；B，1: p GBKT7原质粒,2:EcoRI/BamHI双酶切p GBKT7, M: 15000bp marker；C，1: EcoRI/BamHI双酶切p GEM-T-MdbZIP26；D，1-8： 含MdbZIP26–BD的大肠杆菌的菌液PCR鉴定Figure 3-3 MdbZIP26 self-activation vector constructionA, 1296 bp fragment of MdbZIP26, M: 2000 bp marker; B,1: pGBKT7 original plasmid, 2:EcoRI/BamHI double digestion pGBKT7, M: 15000 bp marker; C,1: EcoRI/BamHI double digestion pGEM-T-MdbZIP26–BD; D, 1-8: PCR results of E. coli containing MdbZIP26–BD3.2.2 MdbZIP26 基因自激活活性鉴定将两个已知具有互作关系的 pGBKT7-P53 和 pGADT7-T7 分别转化于酵母 Y2H和 Y187，并共同涂于含有 SD-Leu-Trp 和 SD-Leu-Trp / x-α-gal / AbA 的培养皿中，其结果如图3-4所示，pGBKT7-P53 和 pGADT7-T7 具有互作关系在 SD-Leu-Trp/x-α-ga / AbA 的平板上生长的菌落显示蓝色，其对 AbA 具有抗性，说明载体的功能正常可用于自激活实验。之后，对 MdbZIP26 的自激活活性进行验证，将重组后的 pGBKT7
图3-4 MdbZIP26 酵母自激活活性分析Figure 3-4 Analysis of yeast self-activation activity of MdbZIP263.3 MdbZIP26 基因转录后潜在磷酸化位点预测之前研究表明 bZIP 转录因子的磷酸化修饰，对其活性激活以及功能都起很大的作用。对此，根据已知的 bZIP 同源基因的磷酸化位点，通过与拟南芥 AREB1、AREB2、AREB3、番茄 SlABRE 和大豆 GmAREB 进行氨基酸序列比对，对 MdbZIP26 潜在的磷酸化位点进行预测。结果如图3-5所示，在 MdbZIP26 中，除 bZIP 结构域外，还含有四个保守结构域 C1、C2、C3和C4。这些保守结构域中含有可能被丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶磷酸化的靶序列。不同的激酶和识别修饰不同的位点，如共有的序列R / KXXS/T可能是钙依赖蛋白激酶磷酸化的作用位点，RyXXSyT 可能被酪蛋白激酶II磷酸化，SyTXKyT 可能被蛋白激酶C磷酸化，KyRXXXSyT 可能被环鸟甘酸依赖蛋白激酶磷酸化等。
【参考文献】：
期刊论文
[1]干旱对植物影响的研究进展[J]. 王静,康林玉,刘周斌,吕俊恒,刘宇华,邹学校. 湖南农业科学. 2017(07)
[2]植物诱导型启动子研究进展[J]. 孙芳芳,宋洪元. 南方园艺. 2014(02)
[3]高等植物转录因子研究进展[J]. 陈霞,罗世巧,段翠芳,曾日中. 安徽农学通报. 2008(09)
[4]植物基因在转录水平上的调控及其生物学意义[J]. 张椿雨,龙艳,冯吉,孟金陵. 遗传. 2007(07)
[5]植物转录因子的结构与功能[J]. 陈丽. 植物生理学通讯. 1997(06)
博士论文
[1]苹果MdMYB88和MdMYB124转录因子在低温和干旱胁迫中的作用机理研究[D]. 谢银鹏.西北农林科技大学 2018
[2]茶树bZIP家族基因的非生物胁迫响应及C亚家族CsbZIP6和CsbZIP4的功能初步分析[D]. 曹红利.中国农业科学院 2016
[3]苹果HMGR基因家族启动子的克隆及功能分析[D]. 吕东梅.山东农业大学 2016
[4]拟南芥转录因子TGA7参与植物响应干旱胁迫的机制研究[D]. 吴娟娟.中国农业大学 2014
硕士论文
[1]苹果转录因子MdbZIP26基因的抗逆功能研究[D]. 王雅琼.西北农林科技大学 2018
本文编号：3386126
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3386126.html
最近更新
教材专著
