GSK3与p38信号通路抑制剂对HSC扩增的影响暨四种融合基因白血病细胞表型的观察

发布时间：2021-09-06 04:33

　　造血干细胞（HSCs）是造血系统中具有自我更新及分化成所有成熟血液谱系能力的一小群细胞,因此它们对于维持机体的造血内稳态以及免疫功能尤为重要。虽然HSCs移植已经被认为是治疗部分造血系统恶性肿瘤、骨髓或造血障碍以及免疫缺陷的有效疗法,但是在临床上仍存在局限,比如骨髓移植以及外周血造血干细胞移植的配型困难、供体不足以及免疫排斥反应等等。而脐带血造血干细胞移植虽然克服了这些困难,但单个脐带中的HSCs的数量有限,不足以满足病人的造血重建需求。因此,体外扩增HSCs技术就成为了有极大可能突破上述壁垒的武器。目前已有研究指出体外使用p38MAPK信号通路抑制剂和GSK3信号通路抑制剂可有效扩增HSCs,但这些研究中体外培养的对象大多是经过分选的LSK细胞,而面对临床的迫切治疗需求,这类方法繁杂的程序或成为它的短板,更需要重视的是,细胞经过体外一系列的流式分选处理势必会受到不同程度的损伤。因此,能够有效扩增HSCs又能最大程度上减少细胞的损伤,就成为了我们的研究初衷。本课题研究采用全骨髓细胞体外培养,通过这种方式简化了以往研究的繁琐步骤并且减少了细胞损伤。糖原合成激酶3（GSK-3）是一种丝氨酸... 

【文章来源】：上海师范大学上海市

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略词表
第1章 绪论
    1.1 GSK3的活性调节
    1.2 GSK3的底物
    1.3 GSK3的功能
        1.3.1 GSK3α和GSK3β功能相似
        1.3.2 GSK3α和GSK3β的功能各异
    1.4 GSK3在骨骼发育中的作用
    1.5 GSK3在造血中的作用
    1.6 GSK3抑制剂与mTOR抑制剂的联用
    1.7 GSK3与人类疾病
    1.8 展望
第2章 GSK3与p38信号通路抑制剂对HSC扩增的影响
    2.1 前言
    2.2 实验材料
        2.2.1 小鼠
        2.2.2 实验仪器和设备
        2.2.3 实验耗材
        2.2.4 实验试剂
    2.3 实验方法
        2.3.1 实验试剂的配制
        2.3.2 C57BL/6J小鼠骨髓单细胞悬液的制备
        2.3.3 细胞计数
        2.3.4 造血干细胞体外培养
        2.3.5 体外培养后的造血干细胞的收集
        2.3.6 流式分析染色
        2.3.7 流式分析操作
        2.3.8 统计学分析
    2.4 实验结果
        2.4.1 GSK3 信号通路抑制剂 CHIR99021 和 SB216763 抑制剂扩增作用的比较
        2.4.2 GSK3β信号通路抑制剂SB216763合适浓度的确定
        2.4.3 GSK3β信号通路抑制剂 SB216763 和 p38 信号通路抑制剂SB203580 的联合使用
    2.5 小结
第3章 信号通路抑制剂联合处理对造血重建的影响
    3.1 引言
    3.2 实验材料
        3.2.1 小鼠
        3.2.2 实验耗材
        3.2.3 实验试剂
    3.3 实验方法
        3.3.1 实验试剂的配制
        3.3.2 CD45.1小鼠全骨髓单细胞悬液的制备
        3.3.3 细胞计数
        3.3.4 小鼠全骨髓细胞的体外培养
        3.3.5 体外培养后全骨髓细胞的收集
        3.3.6 竞争性移植
        3.3.7 小鼠外周血采集
        3.3.8 小鼠外周血流式分析
        3.3.9 克隆形成实验
        3.3.10 统计学分析
    3.4 体外竞争性移植实验的设计
    3.5 实验结果
        3.5.1 抑制剂联合处理对造血干细胞移植后嵌合能力的影响
        3.5.2 抑制剂联合处理对造血干细胞长效造血重建能力的影响
        3.5.3 CFU实验研究经过抑制剂联合处理后的造血干细胞的多向重建能力
    3.6 小结
第4章 四种融合基因白血病细胞表型的观察
    4.1 引言
    4.2 实验材料
        4.2.1 细胞株及实验试剂
        4.2.2 实验耗材
        4.2.3 实验设备
    4.3 实验方法
        4.3.1 MLL-ENLShort细胞株的构建
        4.3.2 体内移植
        4.3.3 细胞周期分析
        4.3.4 药物MTT法
        4.3.5 克隆形成实验
        4.3.6 生长曲线
        4.3.7 细胞计数
        4.3.8 统计学分析
    4.4 实验结果
        4.4.1 四种白血病细胞株的细胞周期比较
        4.4.2 四种白血病细胞株对阿糖胞苷的耐药性比较
        4.4.3 四种白血病细胞株克隆数目及形态的比较
        4.4.4 四种白血病细胞株生长趋势的比较
    4.5 小结
讨论
参考文献
致谢



本文编号：3386755