蒺藜苜蓿（Medicago truncatula）细胞分裂素应答调控及IPT基因功能鉴定
发布时间：2021-09-08 20:12
蒺藜苜蓿（Medicago truncatula）是一种重要的豆科牧草植物,也是研究豆科植物的模式植物。目前关于植物细胞分裂素的响应应答机制,主要在拟南芥、水稻等传统模式植物中开展,蒺藜苜蓿对细胞分裂素的响应机制未知;相关研究集中在细胞分裂素直接诱导方面,关于细胞分裂素抑制剂对植物的影响未知;同时相关研究主要集中在短期诱导上,关于长期使用细胞分裂素对植物的影响,无相关研究报道。本研究主要是分析蒺藜苜蓿对细胞分裂素及细胞分裂素抑制剂长期应答机制。通过使用两种化合物,6-苄氨基嘌呤（6-benzylaminopurine,6-BA）与洛伐他汀（lovastatin）分别行使细胞分裂素的诱导和抑制作用,对蒺藜苜蓿幼苗进行长时间处理。通过高通量测序技术,进行差异表达基因筛选和分析;并对1个细胞分裂素合成关键调控基因IPT进行了深入的功能研究,主要结果如下:1.对蒺藜苜蓿进行6-BA处理及lovastatin处理,进行高通量测序。共构建了9个测序文库,测序和数据处理共获得了67.3Gb clean data;经过数据拼装,总共鉴定出33,782个基因和55,558条转录本,通过进一步分析发现,存...
【文章来源】：北京林业大学北京市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：99 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
三种生长条件下蒺藜苜蓿表型A：三种生长条件下蒺藜苜蓿整株表型；B：三种生长条件下蒺藜苜蓿小叶表型；Bar=1mm
蒺藜苜蓿细胞分裂素响应转录组文库构建及测序20图3.2不同生长条件下蒺藜苜蓿激素测定A：不同生长条件下蒺藜苜蓿zeatin水平；B：不同生长条件下蒺藜苜蓿6-BA水平。*，代表与未处理蒺藜苜蓿相比，差异极显著（p<0.01）；**，代表细胞分离素抑制剂处理蒺藜苜蓿与未处理蒺藜苜蓿相比，差异极显著（p<0.01）。Ctrl：未处理蒺藜苜蓿；Cyto：6-BA处理蒺藜苜蓿；Inh：lovastatin处理蒺藜苜蓿Figure3.2PlanthormonemeasurementsofMedicagotruncatulaunderdifferenttreatmentsA:ZeatinlevlesofMedicagotruncatulaatdifferentgrowingconditions.B:The6-BAlevelsofMedicagotruncatulaatdifferentgrowingconditions.*,indicatessignificantdifferencesofthemeansatp<0.01betweencytokininorlovastatintreatedsamplesandun-treatedsamplesforplanthormonemeasurements(n=3).**,indicatessignificantdifferencesofthemeansatp<0.01betweenplantsoflovastatintreatmentandun-treatmentforplanthormonemeasurements(n=3).Ctrl:Medicagotruncatulawithun-treatment;Cyto:Medicagotruncatulawith6-BAtreatment;Inh:Medicagotruncatulawithlovastatintreatment.3.3.2RNA质检分析提取总RNA经0.9%琼脂糖凝胶电泳分析，结果显示：所有的RNA条带清晰，无蛋白质污染、不存在明显的降解，满足进行进一步检测和分析的要求（图3.3）。图3.3RNA琼脂糖凝胶电泳分析Figure3.3RNAanalysisofMedicagotruncatula使用Agilent2100对经过琼脂糖凝胶电泳检测合格的RNA样品，进行进一步分析，主要是分析其RIN值，检测样品的完整度。结果显示：所有的样品RIN值均大于8.5，
蒺藜苜蓿细胞分裂素响应转录组文库构建及测序20图3.2不同生长条件下蒺藜苜蓿激素测定A：不同生长条件下蒺藜苜蓿zeatin水平；B：不同生长条件下蒺藜苜蓿6-BA水平。*，代表与未处理蒺藜苜蓿相比，差异极显著（p<0.01）；**，代表细胞分离素抑制剂处理蒺藜苜蓿与未处理蒺藜苜蓿相比，差异极显著（p<0.01）。Ctrl：未处理蒺藜苜蓿；Cyto：6-BA处理蒺藜苜蓿；Inh：lovastatin处理蒺藜苜蓿Figure3.2PlanthormonemeasurementsofMedicagotruncatulaunderdifferenttreatmentsA:ZeatinlevlesofMedicagotruncatulaatdifferentgrowingconditions.B:The6-BAlevelsofMedicagotruncatulaatdifferentgrowingconditions.*,indicatessignificantdifferencesofthemeansatp<0.01betweencytokininorlovastatintreatedsamplesandun-treatedsamplesforplanthormonemeasurements(n=3).**,indicatessignificantdifferencesofthemeansatp<0.01betweenplantsoflovastatintreatmentandun-treatmentforplanthormonemeasurements(n=3).Ctrl:Medicagotruncatulawithun-treatment;Cyto:Medicagotruncatulawith6-BAtreatment;Inh:Medicagotruncatulawithlovastatintreatment.3.3.2RNA质检分析提取总RNA经0.9%琼脂糖凝胶电泳分析，结果显示：所有的RNA条带清晰，无蛋白质污染、不存在明显的降解，满足进行进一步检测和分析的要求（图3.3）。图3.3RNA琼脂糖凝胶电泳分析Figure3.3RNAanalysisofMedicagotruncatula使用Agilent2100对经过琼脂糖凝胶电泳检测合格的RNA样品，进行进一步分析，主要是分析其RIN值，检测样品的完整度。结果显示：所有的样品RIN值均大于8.5，
【参考文献】：
期刊论文
[1]北沙参异戊烯基转移酶GlIPT1基因的克隆及生物信息学分析[J]. 陈泓宇,任宏伟,张玉喜,王卫青,谭玲玲,高婷. 世界科学技术-中医药现代化. 2020(04)
[2]生长素（IAA）和赤霉素（GA3）不同配比对韭菜种子萌发的影响[J]. 冯腾腾,魏猛,樊继德,黄怀成,陈飞. 长江蔬菜. 2020(02)
[3]细胞分裂素能解除植物顶端优势的原理[J]. 杨洪斌. 生物学教学. 2020(01)
[4]新中国成立70年来植物激素研究进展[J]. 黎家,李传友. 中国科学:生命科学. 2019(10)
[5]乙烯利和氯吡脲在黄瓜制种中的应用[J]. 孔维良,李愚鹤,黄洪宇,张利东,李加旺. 中国瓜菜. 2019(10)
[6]花芽内高含量细胞分裂素有利于促进梨花朵的分化[J]. 王世明. 中国果业信息. 2019(09)
[7]不同浓度6-BA对白芨丛芽诱导的影响[J]. 李云海,黑有兰,陈丽华. 现代农业科技. 2019(15)
[8]0.1%氯吡脲可溶性液剂对西瓜产量和可溶性固形物含量的影响[J]. 张雪彬,杨小锋,曹明,陈连珠,陶凯. 现代农业科技. 2019(08)
[9]生长素介导细胞分裂素(玉米素)调控杜鹃兰侧芽萌发[J]. 吕享,叶睿华,田海露,吉宁,刘思佳,张明生. 农业生物技术学报. 2018(11)
[10]中国农大揭示脱落酸和细胞分裂素信号途径拮抗调控逆境应答的新机制[J]. 郑庆伟. 农药市场信息. 2018(14)
博士论文
[1]细胞分裂素B类ARRs在发育和环境信号对TAA1的转录调控中扮演核心的角色[D]. 闫振伟.厦门大学 2017
[2]紫花苜蓿MsZFN及拟南芥HST基因鉴定[D]. 晁跃辉.中国农业科学院 2014
[3]拟南芥细胞分裂素N-糖基转移酶基因功能分析[D]. 王军.山东大学 2011
硕士论文
[1]苹果细胞分裂素氧化/脱氢酶MdCKX7.2的基因克隆及功能鉴定[D]. 姚继芳.山东农业大学 2019
[2]生长素和细胞分裂素对荸荠离体植株再生的影响[D]. 徐映萍.浙江大学 2019
[3]番茄SlIPT4基因对叶片衰老和果实番茄红素合成的调控研究[D]. 张勇.重庆大学 2018
[4]细胞分裂素转运蛋白AtABCG14互作蛋白的鉴定[D]. 贺伟敏.浙江师范大学 2018
[5]细胞分裂素转运蛋白AtABCG14在地上组织的生物学功能研究[D]. 丁炳莉.浙江师范大学 2017
[6]外源6-苄基嘌呤、水杨酸对高温干旱复合胁迫下半夏植株抗逆性的影响[D]. 徐封丰.西南大学 2014
[7]IPT基因及GmSARK启动子的克隆、表达载体构建及植物转化[D]. 霍巍巍.吉林农业大学 2012
[8]拟南芥细胞分裂素O-糖基转移酶基因功能分析[D]. 马新梅.山东大学 2011
[9]紫花苜蓿锌指蛋白基因的克隆及初步鉴定[D]. 晁跃辉.重庆大学 2009
[10]PSAG12-ipt基因转化烟草抑制早衰的研究[D]. 王哲.河南农业大学 2007
本文编号：3391411
【文章来源】：北京林业大学北京市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：99 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
三种生长条件下蒺藜苜蓿表型A：三种生长条件下蒺藜苜蓿整株表型；B：三种生长条件下蒺藜苜蓿小叶表型；Bar=1mm
蒺藜苜蓿细胞分裂素响应转录组文库构建及测序20图3.2不同生长条件下蒺藜苜蓿激素测定A：不同生长条件下蒺藜苜蓿zeatin水平；B：不同生长条件下蒺藜苜蓿6-BA水平。*，代表与未处理蒺藜苜蓿相比，差异极显著（p<0.01）；**，代表细胞分离素抑制剂处理蒺藜苜蓿与未处理蒺藜苜蓿相比，差异极显著（p<0.01）。Ctrl：未处理蒺藜苜蓿；Cyto：6-BA处理蒺藜苜蓿；Inh：lovastatin处理蒺藜苜蓿Figure3.2PlanthormonemeasurementsofMedicagotruncatulaunderdifferenttreatmentsA:ZeatinlevlesofMedicagotruncatulaatdifferentgrowingconditions.B:The6-BAlevelsofMedicagotruncatulaatdifferentgrowingconditions.*,indicatessignificantdifferencesofthemeansatp<0.01betweencytokininorlovastatintreatedsamplesandun-treatedsamplesforplanthormonemeasurements(n=3).**,indicatessignificantdifferencesofthemeansatp<0.01betweenplantsoflovastatintreatmentandun-treatmentforplanthormonemeasurements(n=3).Ctrl:Medicagotruncatulawithun-treatment;Cyto:Medicagotruncatulawith6-BAtreatment;Inh:Medicagotruncatulawithlovastatintreatment.3.3.2RNA质检分析提取总RNA经0.9%琼脂糖凝胶电泳分析，结果显示：所有的RNA条带清晰，无蛋白质污染、不存在明显的降解，满足进行进一步检测和分析的要求（图3.3）。图3.3RNA琼脂糖凝胶电泳分析Figure3.3RNAanalysisofMedicagotruncatula使用Agilent2100对经过琼脂糖凝胶电泳检测合格的RNA样品，进行进一步分析，主要是分析其RIN值，检测样品的完整度。结果显示：所有的样品RIN值均大于8.5，
蒺藜苜蓿细胞分裂素响应转录组文库构建及测序20图3.2不同生长条件下蒺藜苜蓿激素测定A：不同生长条件下蒺藜苜蓿zeatin水平；B：不同生长条件下蒺藜苜蓿6-BA水平。*，代表与未处理蒺藜苜蓿相比，差异极显著（p<0.01）；**，代表细胞分离素抑制剂处理蒺藜苜蓿与未处理蒺藜苜蓿相比，差异极显著（p<0.01）。Ctrl：未处理蒺藜苜蓿；Cyto：6-BA处理蒺藜苜蓿；Inh：lovastatin处理蒺藜苜蓿Figure3.2PlanthormonemeasurementsofMedicagotruncatulaunderdifferenttreatmentsA:ZeatinlevlesofMedicagotruncatulaatdifferentgrowingconditions.B:The6-BAlevelsofMedicagotruncatulaatdifferentgrowingconditions.*,indicatessignificantdifferencesofthemeansatp<0.01betweencytokininorlovastatintreatedsamplesandun-treatedsamplesforplanthormonemeasurements(n=3).**,indicatessignificantdifferencesofthemeansatp<0.01betweenplantsoflovastatintreatmentandun-treatmentforplanthormonemeasurements(n=3).Ctrl:Medicagotruncatulawithun-treatment;Cyto:Medicagotruncatulawith6-BAtreatment;Inh:Medicagotruncatulawithlovastatintreatment.3.3.2RNA质检分析提取总RNA经0.9%琼脂糖凝胶电泳分析，结果显示：所有的RNA条带清晰，无蛋白质污染、不存在明显的降解，满足进行进一步检测和分析的要求（图3.3）。图3.3RNA琼脂糖凝胶电泳分析Figure3.3RNAanalysisofMedicagotruncatula使用Agilent2100对经过琼脂糖凝胶电泳检测合格的RNA样品，进行进一步分析，主要是分析其RIN值，检测样品的完整度。结果显示：所有的样品RIN值均大于8.5，
【参考文献】：
期刊论文
[1]北沙参异戊烯基转移酶GlIPT1基因的克隆及生物信息学分析[J]. 陈泓宇,任宏伟,张玉喜,王卫青,谭玲玲,高婷. 世界科学技术-中医药现代化. 2020(04)
[2]生长素（IAA）和赤霉素（GA3）不同配比对韭菜种子萌发的影响[J]. 冯腾腾,魏猛,樊继德,黄怀成,陈飞. 长江蔬菜. 2020(02)
[3]细胞分裂素能解除植物顶端优势的原理[J]. 杨洪斌. 生物学教学. 2020(01)
[4]新中国成立70年来植物激素研究进展[J]. 黎家,李传友. 中国科学:生命科学. 2019(10)
[5]乙烯利和氯吡脲在黄瓜制种中的应用[J]. 孔维良,李愚鹤,黄洪宇,张利东,李加旺. 中国瓜菜. 2019(10)
[6]花芽内高含量细胞分裂素有利于促进梨花朵的分化[J]. 王世明. 中国果业信息. 2019(09)
[7]不同浓度6-BA对白芨丛芽诱导的影响[J]. 李云海,黑有兰,陈丽华. 现代农业科技. 2019(15)
[8]0.1%氯吡脲可溶性液剂对西瓜产量和可溶性固形物含量的影响[J]. 张雪彬,杨小锋,曹明,陈连珠,陶凯. 现代农业科技. 2019(08)
[9]生长素介导细胞分裂素(玉米素)调控杜鹃兰侧芽萌发[J]. 吕享,叶睿华,田海露,吉宁,刘思佳,张明生. 农业生物技术学报. 2018(11)
[10]中国农大揭示脱落酸和细胞分裂素信号途径拮抗调控逆境应答的新机制[J]. 郑庆伟. 农药市场信息. 2018(14)
博士论文
[1]细胞分裂素B类ARRs在发育和环境信号对TAA1的转录调控中扮演核心的角色[D]. 闫振伟.厦门大学 2017
[2]紫花苜蓿MsZFN及拟南芥HST基因鉴定[D]. 晁跃辉.中国农业科学院 2014
[3]拟南芥细胞分裂素N-糖基转移酶基因功能分析[D]. 王军.山东大学 2011
硕士论文
[1]苹果细胞分裂素氧化/脱氢酶MdCKX7.2的基因克隆及功能鉴定[D]. 姚继芳.山东农业大学 2019
[2]生长素和细胞分裂素对荸荠离体植株再生的影响[D]. 徐映萍.浙江大学 2019
[3]番茄SlIPT4基因对叶片衰老和果实番茄红素合成的调控研究[D]. 张勇.重庆大学 2018
[4]细胞分裂素转运蛋白AtABCG14互作蛋白的鉴定[D]. 贺伟敏.浙江师范大学 2018
[5]细胞分裂素转运蛋白AtABCG14在地上组织的生物学功能研究[D]. 丁炳莉.浙江师范大学 2017
[6]外源6-苄基嘌呤、水杨酸对高温干旱复合胁迫下半夏植株抗逆性的影响[D]. 徐封丰.西南大学 2014
[7]IPT基因及GmSARK启动子的克隆、表达载体构建及植物转化[D]. 霍巍巍.吉林农业大学 2012
[8]拟南芥细胞分裂素O-糖基转移酶基因功能分析[D]. 马新梅.山东大学 2011
[9]紫花苜蓿锌指蛋白基因的克隆及初步鉴定[D]. 晁跃辉.重庆大学 2009
[10]PSAG12-ipt基因转化烟草抑制早衰的研究[D]. 王哲.河南农业大学 2007
本文编号：3391411
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