基于MAPK基因沉默和TMT标记联合LC-MS/MS技术研究雌二醇作用Ishikawa细胞的影响

发布时间：2021-09-09 10:11

　　第一部分慢病毒介导的MAPK基因沉默对雌二醇作用子宫内膜癌细胞Ishikawa的影响1慢病毒shRNA载体构建并建立稳定转染的Ishikawa细胞株[目的]本课题组前期发现雌二醇可以通过MAPK信号通路促进子宫内膜癌细胞的发生发展,为明确MAPK信号通路对雌二醇作用子宫内膜癌细胞的相关机制,我们利用RNAi沉默子宫内膜癌细胞Ishikawa中的MAPK基因,并筛选稳定表达的细胞株,为探究MAPK基因低表达对雌二醇作用子宫内膜癌细胞的影响奠定基础。[方法]（1）设计合成4组特异性针对MAPK基因的siRNA,构建shRNA质粒载体,感染Ishikawa细胞。（2）利用RT-PCR和Western blot实验检测各组对目的基因的抑制效果,筛选出沉默效果最佳的靶点。（3）将选取的最佳靶点包装成慢病毒shRNA载体,感染Ishikawa细胞。（4）将感染目的基因的细胞Ishikawa,经流式分选获得稳定的细胞株,采用RT-PCR和Western blot实验检测各组对目的基因的抑制效果。[结果]（1）RT-PCR和Western blot筛选出最佳干扰靶点,siRNA序列为:GGACTGTC... 

【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区

【文章页数】：107 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１?ｐＧＦＰ－Ｖ－ＲＳ质粒载体??

图１－２慢病毒载体??

表１?－３?ＭＡＰＫ质粒ｓｈＲＮＡ序列信息表??Ｔａｂｌｅ?１－３?ＭＡＰＫ?ｓｈＲＮＡ?ｐｌａｓｍｉｄ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ?ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ?ｔａｂｌｅ??组别?ｓｈＲＮＡ序列信息??ＭＡＰＫ－ｐＧＦＰ－??Ｖ－ＲＳ?１?组?－ＡＡＴＴＣＡＡＡＡＧＧＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＴＡＧＡＧＡＴＧＧＣＧＧＴＧ－３’??ＭＡＰＫ－ｐＧＦＰ－?５?’??Ｖ－ＲＳ?２?组?－ＣＣＧＧＧＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＴＡＧＡＧＡＴＧＧＣＧＧＴＴＧＧＧＴＴＴ?Ｇ；３Ｉ４．２质粒转染??ＭＡＰＫｓｈＲＮＡ质粒转染Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞４８小时后，即可以在荧光显微下观察到转染了?ＭＡＰＫｓｈＲＮＡ质粒的Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞呈现出绿色荧光，如１－４所示，可以进行下一步实验。??

【参考文献】：
期刊论文
[1]雌激素通过激活AKT通路产生的细胞因子增强子宫内膜癌细胞增殖能力[J]. 陆媛媛,张洁清,梁少凤,李力.  中国癌症杂志. 2013(11)
[2]雌二醇对子宫内膜癌细胞AKT通路中细胞因子的影响[J]. 丁兰芳,王晓谦,陆媛媛,宋红林,李力,张洁清.  中国肿瘤临床. 2011(20)
[3]AKT2-siRNA对肺癌细胞NCI-H446沉默作用的研究[J]. 曹婷婷,张茂林,赵国强,卢滨,王静.  中国肺癌杂志. 2008(04)
[4]siRNA理性设计原理分析[J]. 方翔,曹以诚,杜正平,郭旭,卓敏.  生命的化学. 2007(04)
[5]蛋白质组学在肺癌诊治研究中的应用[J]. 戴明,罗荣城.  癌症. 2007(06)
[6]磷酸化蛋白质分析技术在蛋白质组研究中的应用[J]. 王京兰,钱小红.  分析化学. 2005(07)
[7]用蛋白质组学方法解析磷酸化蛋白质[J]. 章晓鹏,肖志强,陈主初.  生命的化学. 2005(03)
[8]磷酸酪氨酸蛋白专一抗体的制备和纯化[J]. 朱曙东,赵文君,张光毅.  生物化学杂志. 1997(05)



本文编号：3391909