苦荞蔗糖合酶SuSy基因在大肠杆菌中的表达及其纯化

发布时间：2021-09-11 16:13

　　【目的】探究苦荞蔗糖合酶结构与功能的关系,构建表达载体以实现SuSy基因在大肠杆菌中的表达,并经亲和层析纯化后得到重组SuSy蛋白,为进一步研究该酶的结构和功能奠定基础.【方法】以苦荞（Fagopyrum tataricum）cDNA文库中克隆得到的蔗糖合酶基因重组质粒为模板,PCR扩增得到SuSy编码序列,将其与原核生物表达载体pET28a相连接构建了重组表达载体pET28a-SuSy,经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切及测序鉴定正确后将其转入大肠杆菌（Escherichia coli）感受态细胞BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达SuSy重组蛋白,并对其诱导表达条件进行优化.【结果】在37℃、1.2 mmol/L IPTG诱导10 h时,SuSy蛋白表达量最高,分子量大小约为53.4 ku,超声破碎后经SDS-PAGE检测到该蛋白以包涵体形式存在.【结论】利用Co²⁺亲和柱层析纯化和His-tag鉴定得到了高纯度的重组SuSy蛋白,为该酶结构与功能的研究及多克隆抗体制备奠定了基础. 

【文章来源】：甘肃农业大学学报. 2020,55(03)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

包涵体复性结果分析

纯化SuSy的SDS-PAGE

电泳结果如图1所示,在1 000～2 000 bp之间有1条特异DNA条带(图1),大小与预期结果一致.图2 重组质粒pET-28a-SuSy的PCR和双酶切鉴定

【参考文献】：
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本文编号：3393311