ERCC1基因沉默对非小细胞肺癌化疗敏感性的影响

发布时间：2021-09-15 06:31

　　目的本研究旨在探讨沉默ERCC1基因后顺铂、紫杉醇、培美曲塞单药或者联合用药作用对非小细胞肺癌细胞产生的影响。方法利用TCGA数据库中的数据,比较肺鳞癌和肺腺癌与其对应的癌旁组织中ERCC1基因的表达水平。使用RT-PCR技术筛选ERCC1高表达肺癌细胞株。构建ERCC1 siRNA慢病毒载体LV-ERCC1-siRNA1和LV-ERCC1-siRNA2,并将其转染A549细胞。Western blot技术检测细胞中ERCC1的蛋白表达水平,确认转染是否成功。为了确定ERCC1基因的表达与细胞对顺铂,紫杉醇和培美曲塞的药物敏感性之间的关系。将化疗药物顺铂,紫杉醇和培美曲塞采用单独用药或者联合用药分别处理转染慢病毒的A549细胞,并使用CCK法和集落形成实验测定细胞存活率和细胞集落形成能力。结果1本研究分析了TCGA数据库中535例肺腺癌和59例对应的癌旁组织中ERCC1的表达水平,结果发现,ERCC1基因在肺腺癌组织中的表达水平（中位数为2082）远远高于其在癌旁组织中的表达水平（中位数为1274）,差异具有统计学意义（Z=-4.901,P=0.001）。ERCC1基因在肺鳞癌组织（5... 

【文章来源】：华北理工大学河北省

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

RNAi慢病毒载体图谱

华北理工大学硕士学位论文。取 200μl 第 5 步中配制的细胞裂解液加入到第 4 步 EP 管中待裂解的到冰上。拿起 EP 管用手轻轻弹起底部细胞，此过程共 20min，每过 2-3m，然后再放到冰上，如此重复。14000 RCF，温度设定 4℃，时间为 5min 离心，将上清液吸出到新A 法测蛋白质浓度使用 BCA 蛋白测定试剂盒，按说明书的步骤，提取 ERCC1 的蛋白制标准曲线如（图2），最后得到蛋白质浓度。

癌组织 1477 2082 28290.001组织 1145 1274 1971癌组织 2193 3004 40420.100组织 2138 2721 3361位数癌细胞株 ERCC1 基因的表达 A549、NCI-H23 和 NCI-H2030 三个细胞系测定其中 ERCC1 的表达进行了半定量 PCR，结果显示，ERCC1 在 NCI-H23 和 NCI-H2030 细表达，而在 A549 细胞中呈高表达。ERCC1 mRNA 在 A549、NCI-H2-H23 细胞中的相对表达量分别为 0.16±0.017、0.037±0.01 和 0.026±0.00CC1 mRNA 在三组细胞系中相对表达量，NCI-H23 组和 NCI-H2030 组显著性（P=0.288），A549 组与 NCI-H23 组和 NCI-H2030 组之间均存异（P=0.001，P=0.001）（图 3）。因此，我们选择 A549 细胞进行后

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：3395581