Rac3基因通过mTOR通路抑制肺腺癌细胞自噬的研究

发布时间：2021-09-18 11:49

　　目的:肺癌发病率及死亡率在全球呈现逐年上升趋势。肺癌以发现晚,生存期短为特征。虽然积极的手术治疗及靶向药物的发展在一定程度上改善了患者的无病生存期及5年生存率,但是提高并不明显。Rac3（ras-related C3 botulinum toxin substrate 3）在多种恶性肿瘤中调控细胞凋亡、细胞周期、侵袭迁移等恶性行为。本课题组在前期研究中对Rac3在肺腺癌中的表达进行了检测,对肺癌细胞凋亡、增殖、侵袭及转移进行了观察,并探讨了其作用机制,自噬是细胞程序化死亡的最重要因素之一,也是细胞自我更新的机制之一,对其调控机制进行探讨是肺癌研究的重要方向。本研究拟观察Rac3对肺腺癌细胞自噬的影响,进一步深入研究其调控机制,目的在于为进一步深入研究Rac3在肺腺癌恶性行为中的调控机制提供基础研究数据,为肺癌诊断及预后评估提供新的分子标志物,为未来治疗提供新的靶向候选基因。研究方法:1.以Western blot及qRT-PCR检测Rac3在四株肺腺癌细胞株（A549、H1975、H358、NH-1299）中表达。2.对A549细胞给予转染LV-Rac3-RNAi敲减Rac3,H129... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：49 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

Westernblot及qRT-PCR检测Rac3在肺腺癌细胞株中表达A.Rac3蛋白在四株肺腺癌细胞中表达，B.Rac3mRNA在四株肺腺癌细胞中表达

中国医科大学硕士学位论文113.2LV-Rac3-RNAi及pCMV-Rac3转染NH-1299细胞，检测转染效率3.2.1LV-Rac3-RNAi转染A549细胞在Rac3表达高的A549细胞给予转染LV-Rac3-RNAi敲减Rac3表达，分别以免疫荧光、Westernblot及qRT-PCR检测转染效率，免疫荧光显示，转染72h后，荧光显微镜下观察，转染效率约为90%，见图3.2.1A。Westernblot及qRT-PCR检测显示，Rac3蛋白及mRNA敲减后表达降低约80%（P＜0.001），图3.2.1B、C。图3.2.1LV-Rac3-RNAi转染A549细胞，检测转染效率A.免疫荧光检测LV-Rac3-RNAi转染效率，B.Westernblot验证敲减后Rac3在蛋白水平表达，C.qRT-PCR验证敲减后Rac3在mRNA水平表达,(与siNC比较，***P＜0.001)。

中国医科大学硕士学位论文123.2.2pCMV-Rac3转染NH-1299细胞在Rac3表达低的H1299细胞给予转染pCMV-Rac3上调Rac3表达，分别以免疫荧光、Westernblot及qRT-PCR检测转染效率，免疫荧光显示，转染72h后，荧光显微镜下观察，转染效率约为90%，见图3.2.2A。Westernblot及qRT-PCR检测显示，Rac3蛋白及mRNA敲减后表达升高约10倍（P＜0.001），图3.2.2B、C。图3.2.2pCMV-Rac3转染NH-1299细胞，检测转染效率A.免疫荧光检测pCMV-Rac3转染效率，B.Westernblot验证转染Rac3在蛋白水平表达，C.qRT-PCR验证转染后Rac3在mRNA水平表达，(与Vector比较，***P＜0.001)。

【参考文献】：
期刊论文
[1]Feedback regulation between phosphatidylinositol-3,4,5-trisphosphate dependent Rac exchange factor 1 and transforming growth factor β1 and prognostic value in gastric cancer[J]. Qi Shao,Zhi-Ming Chen.  World Journal of Gastroenterology. 2020(01)

硕士论文
[1]Rac3在肺腺癌中调控ERK信号通路的分子机制研究[D]. 李精汉.中国医科大学 2019
[2]Rac3与E-cadherin在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床相关性研究[D]. 祖鹏.中国医科大学 2018



本文编号：3400084