E3L基因缺失型痘苗病毒的构建

发布时间：2021-09-22 23:03

　　目的构建E3L基因缺失型痘苗病毒,并评价其毒力和安全性。方法根据天坛株痘苗病毒全基因组设计合成以E3L基因为重组臂,并含有Loxp序列、早晚期复合强启动子（PE/L）、增强型绿色荧光蛋白（EGFP）、终止信号（T5nT）的重组痘苗病毒穿梭质粒pVTTΔE3L-EGFP,然后利用同源重组和Cre/Loxp系统构建E3L基因缺失型痘苗病毒VTTΔE3L。检测VTTΔE3L对BHK-21、HEK-293、OA3.TS、Marc-145和DF-1细胞存活率的影响并测定其在上述细胞中的一步生长曲线,初步明确VTTΔE3L的毒力和复制能力;连续传代40代,检测VTTΔE3L的遗传稳定性;滴鼻感染BALB/c小鼠,检测其对小鼠体重变化的影响,初步明确VTTΔE3L的安全性。结果利用EGFP筛选标记和Cre/Loxp特异性敲除系统,通过多次挑斑筛选获得了E3L基因缺失型痘苗病毒VTTΔE3L,且PCR鉴定VTT目的条带大小为359bp,rVTTΔE3L-EGFP目的条带大小为1 206bp。结晶紫染色图表明VTTΔE3L对BHK-21细胞的抑制作用明显弱于VTT,通过连续传代40代,PCR没有检测到重... 

【文章来源】：中国病原生物学杂志. 2020,15(11)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

基因缺失型痘苗病毒VTTΔE3L的构建、筛选及鉴定

VTTΔE3L感染HEK-293细胞、OA3.TS细胞、Marc-145细胞和DF-1细胞的存活率如图3所示，其中随着VTTΔE3L和VTT在不同细胞株中感染时间的延长，两者对细胞的毒性均增强，但VTTΔE3L的毒性低于VTT。VTTΔE3L和VTT对Marc-145细胞毒性较强，细胞存活率较低。图3 4种细胞感染基因缺失型痘苗病毒VTTΔE3L后的存活率变化

4种细胞感染基因缺失型痘苗病毒VTTΔE3L后的存活率变化

【参考文献】：
期刊论文
[1]高效重组痘苗病毒天坛株载体系统的建立[J]. 张迪,许丰雯,熊梓辰,郭斐.  病毒学报. 2019(02)
[2]甲3型流感病毒M2基因在痘苗病毒天坛株中的表达[J]. 王文玲,黄保英,邓瑶,王秀平,谭文杰,阮力.  病毒学报. 2007(05)

博士论文
[1]痘苗病毒天坛株生物学特性研究及其基因工程减毒载体的构建[D]. 方清.武汉大学 2005

硕士论文
[1]基因缺失型天坛株痘苗病毒构建及实验免疫研究[D]. 李一权.吉林农业大学 2016
[2]基因缺失天坛株痘苗病毒弱毒载体的构建及鉴定[D]. 盛媛.吉林农业大学 2014



本文编号：3404533