白桦BpMYB108基因调控抗旱耐盐功能研究
发布时间：2021-09-25 20:19
MYB转录因子是植物中最大的一类转录因子之一,在调控植物生长和逆境胁迫响应中发挥着重要作用。本研究在白桦高盐胁迫下转录组分析中获得一个差异表达基因,命名为BpMYB108。BpMYB108属于R2R3类MYB转录因子,通过对其表达特性分析发现,BpMYB108基因可能与植物应答逆境胁迫相关,进一步研究了BpMYB108基因在提高拟南芥抗旱、耐盐性的功能,主要研究结果如下:1.构建BpMYB108基因与GFP标签蛋白相融合载体,利用基因枪技术瞬时转化洋葱表皮细胞后在激光共聚焦显微镜下观察,结果表明BpMYB108蛋白定位在细胞核上。2.利用实时荧光定量PCR技术,对BpMYB108基因在不同组织中以及不同胁迫处理后在根组织中的时空表达进行了分析,结果显示,BpMYB108基因在白桦根、茎、叶组织中均有表达,其中在茎中表达量最高,而且BpMYB108基因在高盐、干旱及ABA胁迫处理后均上调表达,表明BpMYB108参与白桦对不同胁迫产生的应答反应。3.利用PCR技术克隆获得BpMYB108基因上游1622bp的启动子片段,序列分析表明,该区域含有多个逆境响应、激素响应等相关顺式作用元件。通...
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１不同胁迫处理下办ＭＫＳ／ＯＳ基因在白桦根中的表达量??设定Ｏｈ时的倍数为１，由图（２－１）可以看出：在经过ＮａＣｌ、ＰＥＧ６０００和ＡＢＡ胁迫??处理后，白桦财基因在白桦根组织中均出现不同程度的上调表达
?东北林业大学硕士学位论文????达到最低点；在ＡＢＡ胁迫下，相对表达量同样是先随着时间变化逐渐降低，在１２ｈ时??达到极低点，之后转为升高，在２４ｈ时达到最高点，之后又逐渐降低，但在４８ｈ时出现??了一个极低值，之后又逐渐升高，在７２ｈ时达到了一个相对高点。由以上结果可以得??知，白桦办仳基因在逆境胁迫处理下表达量上调，说明白桦ｇｐＭＫＳｉ㈨基因参与??白桦对逆境胁迫的应答反应。??２．３．２白桦办卵融合ＧＦＰ蛋白标签表达载体的构建??２．３．２．１仳基因全长的获得??以白桦ｃＤＮＡ为模板，扩增带有酶切位点的办仰基因全长，结果如图（２－??２）所示：成功扩増出目的片段。??」４??１０００ｂ”．??图２－２办私基因目的片段全长??（Ｍ：?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ２０００；?１：?仰目的片段?ＰＣＲ?产物）??２．３．２．２?ｐＢＩＵｌ－＾ＢｐＭＦＢＭＳ－ｅＧＦＰ?载体的构建??提取ｐＢＩ１２卜ＢｐＭＹＢ１０８－ｅＧＦＰ大肠杆菌的质粒，分别用ＰＢＩ１２１载体上游引物、基??因下游引物和基因上游引物、载体下游引物进行ＰＣＲ检测，结果如图（２－３）所示：己??成功构建表达载体。??ｌＯＯＯｂｐ?＾￣Ｉ??图?２－３?ｐＢＩ１２１－５ｐＭＴ５ｉ０５－ｅＧＦＰ?载体检测??（Ｍ：ＤＮＡＭａｒｋｅｒＤＬ２０００；ｌ：载体上游引物与基因下游引物ＰＣＲ产物；２：基因上游引物与载体下??游引物ＰＣＲ产物）??２＿３．２．３?ｐＢＩ１２１?却Ａｆｍ？似－ｅＧＦＰ?载体酶切觀??利用限制性内切酶Ｉ和Ｓｗａ?Ｉ对ｐＢＩ?１２１？办财－ｅＧＦＰ载体进行双酶切验??－１６．??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]Epigenetic regulation in plant abiotic stress responses[J]. Ya-Nan Chang,Chen Zhu,Jing Jiang,Huiming Zhang,Jian-Kang Zhu,Cheng-Guo Duan. Journal of Integrative Plant Biology. 2020(05)
[2]中国寒温带不同林龄白桦林碳储量及分配特征[J]. 魏红,满秀玲. 植物生态学报. 2019(10)
[3]新时代背景下白桦树育苗及造林技术分析[J]. 张隆秀. 农业开发与装备. 2020(01)
[4]MYB转录因子在植物盐胁迫调控中的研究进展[J]. 陈娜,迟晓元,潘丽娟,陈明娜,禹山林. 植物生理学报. 2015(09)
[5]拟南芥花药和花粉发育的基因调控[J]. 樊新萍,牛西午. 山西农业科学. 2013(05)
[6]植物MYB转录因子研究[J]. 刘守梅,孙玉强,王慧中. 杭州师范大学学报(自然科学版). 2012(02)
[7]MYB转录因子与植物非生物胁迫抗逆性相关研究进展[J]. 王景晨,黄沆. 科技信息. 2011(06)
[8]盐旱互作对不同生境盐地碱蓬种子萌发和幼苗生长的影响[J]. 刘金萍,高奔,李欣,宋杰,范海,王宝山,赵可夫. 生态学报. 2010(20)
[9]植物Myb转录因子的研究进展[J]. 陈清,汤浩茹,董晓莉,侯艳霞,罗娅,蒋艳,黄琼瑶. 基因组学与应用生物学. 2009(02)
[10]MYB转录因子在植物抗逆胁迫中的作用及其分子机理[J]. 刘蕾,杜海,唐晓凤,吴燕民,黄玉碧,唐益雄. 遗传. 2008(10)
本文编号：3410378
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１不同胁迫处理下办ＭＫＳ／ＯＳ基因在白桦根中的表达量??设定Ｏｈ时的倍数为１，由图（２－１）可以看出：在经过ＮａＣｌ、ＰＥＧ６０００和ＡＢＡ胁迫??处理后，白桦财基因在白桦根组织中均出现不同程度的上调表达
?东北林业大学硕士学位论文????达到最低点；在ＡＢＡ胁迫下，相对表达量同样是先随着时间变化逐渐降低，在１２ｈ时??达到极低点，之后转为升高，在２４ｈ时达到最高点，之后又逐渐降低，但在４８ｈ时出现??了一个极低值，之后又逐渐升高，在７２ｈ时达到了一个相对高点。由以上结果可以得??知，白桦办仳基因在逆境胁迫处理下表达量上调，说明白桦ｇｐＭＫＳｉ㈨基因参与??白桦对逆境胁迫的应答反应。??２．３．２白桦办卵融合ＧＦＰ蛋白标签表达载体的构建??２．３．２．１仳基因全长的获得??以白桦ｃＤＮＡ为模板，扩增带有酶切位点的办仰基因全长，结果如图（２－??２）所示：成功扩増出目的片段。??」４??１０００ｂ”．??图２－２办私基因目的片段全长??（Ｍ：?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ２０００；?１：?仰目的片段?ＰＣＲ?产物）??２．３．２．２?ｐＢＩＵｌ－＾ＢｐＭＦＢＭＳ－ｅＧＦＰ?载体的构建??提取ｐＢＩ１２卜ＢｐＭＹＢ１０８－ｅＧＦＰ大肠杆菌的质粒，分别用ＰＢＩ１２１载体上游引物、基??因下游引物和基因上游引物、载体下游引物进行ＰＣＲ检测，结果如图（２－３）所示：己??成功构建表达载体。??ｌＯＯＯｂｐ?＾￣Ｉ??图?２－３?ｐＢＩ１２１－５ｐＭＴ５ｉ０５－ｅＧＦＰ?载体检测??（Ｍ：ＤＮＡＭａｒｋｅｒＤＬ２０００；ｌ：载体上游引物与基因下游引物ＰＣＲ产物；２：基因上游引物与载体下??游引物ＰＣＲ产物）??２＿３．２．３?ｐＢＩ１２１?却Ａｆｍ？似－ｅＧＦＰ?载体酶切觀??利用限制性内切酶Ｉ和Ｓｗａ?Ｉ对ｐＢＩ?１２１？办财－ｅＧＦＰ载体进行双酶切验??－１６．??
?２白桦办Ｍｒａ／财基因功能研究???证，结果如图（２－４）所示：成功切下条带。??■??５０００ｂｐ?＾￣￣??图２－４融合载体酶切电泳检测??（Ｍ：ＤＮＡＭａｒｋｅｒＤＬ５０００；?１：?ｐＢＩ１２１?酶切前质粒：２：?ｐＢＩ１２１?酶切后质粒）??将验证后的重组质粒进行农杆菌ＥＨＡ１０５的转化及农杆菌菌液ＰＣＲ检测，将检??测正确的单克隆菌液保菌备用。??２＿３．３?ＢｐＭＹＢ１０８蛋白的亚细胞定位??以ｐＢＩ１２１－ｅＧＦＰ质粒为对照，将ｐＢＩ１２１－ＢｐＭＹＢ１０８－ｅＧＦＰ装入钨粉中，通过基因枪??法轰击洋葱表皮细胞，通过激光共聚焦显微镜观察荧光情况。（如图２－５）??ＧＦＰ?Ｂｒｉｇｈｔ?Ｍｅｒｇｅｄ??ｅＧＦＰ?餘＇■養轉撼??ＢｐＭＹＢ１０８－ＧＦＰ??图２－５?ＢｐＭＹＢ１０８蛋白的亚细胞定位??从图中可以看出：ｐＢＩ１２１－ｅＧＦＰ在细胞核与细胞膜中均有ＧＦＰ绿色荧光分布，而??ｐＢＩ１２１－ＢｐＭＹＢ１０８－ｅＧＦＰ只在细胞核中有绿色荧光分布。实验结果说明ＢｐＭＹＢ１０８蛋??白定位于细胞核中。??２．３．４白桦５／７Ｍｙｇ２卵基因的生物信息学分析??２．３．４．１?ＢｐＭＹＢ１０８蛋白的理化性质及保守结构域预测??仳基因的编码区（ＯＲＦ）为９６３ｂｐ，编码一个含３２０个氨基酸残基的蛋??白。利用ＥｘＰＡＳｙ在线软件分析办＿／财基因编码的氨基酸序列，可知该蛋白分子式??－１７－??
【参考文献】：
期刊论文
[1]Epigenetic regulation in plant abiotic stress responses[J]. Ya-Nan Chang,Chen Zhu,Jing Jiang,Huiming Zhang,Jian-Kang Zhu,Cheng-Guo Duan. Journal of Integrative Plant Biology. 2020(05)
[2]中国寒温带不同林龄白桦林碳储量及分配特征[J]. 魏红,满秀玲. 植物生态学报. 2019(10)
[3]新时代背景下白桦树育苗及造林技术分析[J]. 张隆秀. 农业开发与装备. 2020(01)
[4]MYB转录因子在植物盐胁迫调控中的研究进展[J]. 陈娜,迟晓元,潘丽娟,陈明娜,禹山林. 植物生理学报. 2015(09)
[5]拟南芥花药和花粉发育的基因调控[J]. 樊新萍,牛西午. 山西农业科学. 2013(05)
[6]植物MYB转录因子研究[J]. 刘守梅,孙玉强,王慧中. 杭州师范大学学报(自然科学版). 2012(02)
[7]MYB转录因子与植物非生物胁迫抗逆性相关研究进展[J]. 王景晨,黄沆. 科技信息. 2011(06)
[8]盐旱互作对不同生境盐地碱蓬种子萌发和幼苗生长的影响[J]. 刘金萍,高奔,李欣,宋杰,范海,王宝山,赵可夫. 生态学报. 2010(20)
[9]植物Myb转录因子的研究进展[J]. 陈清,汤浩茹,董晓莉,侯艳霞,罗娅,蒋艳,黄琼瑶. 基因组学与应用生物学. 2009(02)
[10]MYB转录因子在植物抗逆胁迫中的作用及其分子机理[J]. 刘蕾,杜海,唐晓凤,吴燕民,黄玉碧,唐益雄. 遗传. 2008(10)
本文编号：3410378
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