马铃薯StMKK1基因RNAi干扰载体的构建及遗传转化

发布时间：2021-09-28 13:52

　　丝裂原活化蛋白激酶MAPK级联反应在植物响应生物与非生物胁迫中发挥着重要作用。为了获得转基因马铃薯,进一步探索 StMKK1在信号转导和胁迫响应中的功能,从四倍体栽培品种马铃薯Desiree的cDNA中克隆到 StMKK1基因302 bp的目的片段,并将目的基因的正向片段利用EcoRⅠ和KpnⅠ,反向片段利用HindⅢ和XbaⅠ与重组载体35s-pART27进行连接,构建成35s- StMKK1-pART27-RNAi表达载体;利用农杆菌介导的遗传转化方法,将35s- StMKK1-pART27-RNAi载体导入马铃薯品种Desiree中,得到7株沉默的阳性马铃薯转基因植株,不同的转基因植株中 StMKK1基因的沉默效率经检测均在92%以上。 

【文章来源】：西北农业学报. 2020,29(12)北大核心CSCD

【文章页数】：9 页

【部分图文】：

35s-StMKK1-part27-RNAi结构简图

将PCR鉴定结果为阳性的株系提取总RNA,反转录后以此为模板，对外源基因表达情况进行分析。以马铃薯的 Stactin-7like基因(XM_006350963)作为内参基因，利用实时荧光定量PCR技术检测马铃薯转化植株叶片中 StMKK1基因的表达量，结果表明：与未转化的Desiree相比， StMKK1基因在转基因植株(RNAi-2-RNAi12)中的表达量均显著下降(其中RNAi-9植株除外),降幅达到92%以上，与未转化Desiree相比，RNAi-9植株中 StMKK1基因的表达量没有显著差异，充分证明转基因植株中 StMKK1基因的表达基本都受到一定程度的干扰(图5)。图4 部分 StMKK1转基因植株的PCR鉴定

部分 StMKK1转基因植株的PCR鉴定

【参考文献】：
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本文编号：3412019