甜菜夜蛾与小白菜硫苷的相互影响及Bra008132基因的初步功能研究

发布时间：2021-10-08 06:38

　　硫代葡萄糖苷是十字花科植物中一种典型的防御代谢产物。黑油筒小白菜对害虫取食表现出高抗性,为了研究其抗虫机理,本实验检测了黑油筒叶片不同生长时期和不同叶位的硫苷含量,讨论了小白菜中硫苷分布的生理和生态意义;利用甜菜夜蛾与黑油筒小白菜含有的硫苷之间的相互作用,探究了黑油筒的抗虫机理,并对响应甜菜夜蛾取食变化剧烈的Bra008132基因,进行了基因及其启动子分析以及相关载体的构建。主要研究结果如下:（1）黑油筒小白菜不同叶期叶片中的硫苷含量变化较大,由四叶期到八叶期硫苷含量增加,十二叶期硫苷含量下降。其中,脂肪族硫苷含量随着叶期的生长呈现下降趋势,在十二叶期时硫苷含量达到最低。吲哚族和芳香族硫苷含量的变化趋势与总硫苷的变化趋势一致,皆在八叶期时硫苷含量最高,四叶期和十二叶期含量较低。对八叶期不同叶位中硫苷含量的检测发现,幼叶相对于老叶,硫苷含量较高。（2）对甜菜夜蛾取食后黑油筒小白菜中的硫苷含量变化检测发现,随着取食时间的延长硫苷含量呈上升的趋势,且吲哚族硫苷比脂肪族硫苷的上升趋势更为明显。对甜菜夜蛾体内谷胱甘肽转移酶活性的检测发现,其活性随取食时间的延长显著提高。对硫苷相关基因的定量分析,... 

【文章来源】：浙江农林大学浙江省

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词
1 文献综述
    1.1 硫代葡萄糖苷
        1.1.1 硫代葡萄糖苷的结构与分类
        1.1.2 硫代葡萄糖苷的合成
            1.1.2.1 氨基酸侧链的延伸
            1.1.2.2 核心结构的形成
            1.1.2.3 侧链的次级修饰
        1.1.3 硫代葡萄糖苷的转运
        1.1.4 硫代葡萄糖苷的降解
        1.1.5 硫代葡萄糖苷的生物学功能
            1.1.5.1 参与植物防御反应
            1.1.5.2 赋予不同风味
            1.1.5.3 抗营养作用
            1.1.5.4 抗癌
    1.2 SOT蛋白研究进展
    1.3 甜菜夜蛾的分布及其危害
    1.4 本研究的目的与意义
2 黑油筒不同叶期以及不同叶位硫苷含量
    2.1 材料与方法
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 仪器与试剂
        2.1.3 黑油筒生长条件
        2.1.4 取样
        2.1.5 硫苷的提取及HPLC检测
    2.2 结果
        2.2.1 不同叶期硫苷含量
        2.2.2 八叶期黑油筒不同叶位硫苷含量
    2.3 讨论
3 甜菜夜蛾与黑油筒硫苷的相互影响
    3.1 材料与方法
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 仪器与试剂
        3.1.3 黑油筒生长条件
        3.1.4 接虫方法
        3.1.5 取样
        3.1.6 硫苷的提取及HPLC检测
        3.1.7 RNA的提取及反转录
        3.1.8 谷胱甘肽转移酶
        3.1.9 硫苷相关基因的定量分析
            3.1.9.1 总RNA反转录为cDNA
            3.1.9.2 硫苷相关基因的定量分析
    3.2 结果
        3.2.1 甜菜夜蛾取食对硫苷含量的影响
        3.2.2 硫苷相关基因的定量分析
        3.2.3 谷胱甘肽转移酶的活性变化
    3.3 讨论
4 小白菜基因Bra008132的克隆与表达分析
    4.1 材料与方法
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 主要实验试剂
        4.1.3 基因组DNA的提取
        4.1.4 植物总RNA的提取
        4.1.5 小白菜Bra008132基因序列的扩增
        4.1.6 相关核苷酸和氨基酸序列分析
        4.1.7 qRT-PCR分析白菜Bra008132的表达
        4.1.8 启动子-GUS报告系统分析白菜Bra008132的表达
            4.1.8.1 启动子片段的克隆
            4.1.8.2 启动子顺式调控元件分析
            4.1.8.3 启动子-GUS融合表达载体的构建
            4.1.8.4 启动子-GUS融合表达载体转化农杆菌
            4.1.8.5 农杆菌介导启动子-GUS融合表达载体转化拟南芥
            4.1.8.6 转基因拟南芥的筛选
        4.1.9 亚细胞定位载体的构建
    4.2 结果
        4.2.1 小白菜Bra008132基因及其启动子的克隆与相关分析
        4.2.2 Bra008132基因在黑油筒小白菜中的时空表达模式
        4.2.3 启动子载体构建
    4.3 讨论
全文结论
附表
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]油菜叶片和种子硫苷总量形成动态研究[J]. 宋志荣,官春云.  作物研究. 2008(02)
[2]甘蓝型油菜叶片与种子硫甙相关性研究[J]. 李培武,赵永国,丁小霞,张文,陈小媚,李云昌,谢从华,傅廷栋.  中国农业科学. 2006(03)
[3]白菜种质资源对小菜蛾抗性的初步评价[J]. 杨峰山,王海平,李锡香,张友军,张文吉.  中国蔬菜. 2004(03)
[4]甜菜夜蛾交配行为和能力[J]. 罗礼智,曹卫菊,钱坤,胡毅.  昆虫学报. 2003(04)
[5]浅谈芥末[J]. 栾金水,汪莹.  中国调味品. 2003(06)
[6]食品和饲料中硫代葡萄糖苷及其降解产物[J]. 廖小军,胡小松,辛力.  食品科学. 1999(12)
[7]甘蓝型油菜营养和生殖器官硫甙总含量的动态研究[J]. 赵竖义,张冬青.  浙江农业科学. 1990(06)



本文编号：3423615