基于实时荧光PCR技术检测水稻转基因成分

发布时间：2021-10-08 06:30

　　水稻是我国主要的粮农作物,是否含有转基因成分与粮食和食品安全息息相关。本试验基于出入境检验检疫行业标准SN/T 2584-2010 《水稻及其产品中转基因成分实时荧光PCR检测方法》设计转基因成分花椰菜花叶病毒35S启动子（Promoter of cauliflower mosaicvirus 35S,p Ca MV35S）、胭脂碱合成酶基因终止子（Terminator of nopaline synthase gene,t NOS）和水稻内源基因蔗糖磷酸合酶基因（Sucrose phosphate synthase,SPS）的引物及探针,建立水稻转基因成分的定性检测方法,并深入研究此方法的检出限、定量能力以及灵敏度。结果表明:此方法具有较强特异性、较低检出限（0. 1ng,1ng）以及较高灵敏度（0. 1%）,并且此方法具有较好的定量能力（扩增效率:100%,95%;相关系数R2:0. 9874,0. 9881）。综上所述,此方法不仅具有灵敏的定性能力还具有定量潜能。 

【文章来源】：农业与技术. 2020,40(24)

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

水稻模板DNA的检出限检测

利用转基因水稻模板DNA做定量标准曲线检测转基因成分p Ca MV35S和t NOS的含量，定量检测标准曲线见图3。从图中可以看出，p Ca MV35S基因的标准曲线为y=-3.306x+53.88,R2=0.9874;t NOS基因的标准曲线为y=-3.442x+53.05,R2=0.9881。通过扩增效率计算公式E (%)=[10(-1/k)-1]×100[16]计算p Ca MV35S和t NOS基因的扩增效率分别为100%和95%。因其扩增效率均在90%～110%，斜率均在-3.1～-3.6,R2均>0.98，所以这两种转基因成分的引物和探针达到定量要求，能够对水稻中的转基因成分进行定量。2.4 掺假灵敏度检测结果

通过对9种转基因作物、非转因水稻、水、阳性质粒pp Ca MV35S和pt NOS进行水稻内源基因SPS及转基因成分p Ca MV35S、t NOS引物和探针的实时荧光PCR检测试验，检测结果如表2和图1所示，本试验以Ct值≤36为检出判定。由表2和图1A可知，SPS基因只在非转基因水稻和转基因水稻中检出，且Ct值都<36;阳性质粒匹配转基因成分的引物和探针结果见表2和图1B、D，可以看出阳性质粒扩增曲线良好，扩增结果的Ct值分别为22.73±0.37 (pp Ca MV35S)和18.23±1.20 (pt NOS);对9种转基因作物p Ca MV35S和t NOS基因检测结果发现2种转基因成分只在转基因水稻中检出，且Ct值分别为23.90±0.25和25.29±0.14 (图1C、E)。以上结果说明水稻内源基因SPS和转基因成分p Ca MV35S、t NOS在样品检测中均表现出良好的特异性。2.2 检出限试验结果

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：3423603