PL3基因编辑水稻编辑位点检测方法的研究

发布时间：2021-10-10 15:52

　　随着基因编辑技术日渐成熟,基因编辑作物不断涌现。本研究对PL3基因编辑水稻编辑位点进行检测研究,以期为基因编辑作物定量检测方法提供技术支持,满足基因编辑作物产品产业化定量标识的需求。以PL3基因编辑水稻为研究对象,以焦磷酸测序、HRM（高分辨率溶解曲线）、双重微滴数字PCR为分析工具,对PL3基因编辑水稻编辑位点进行精准定量检测。（1）通过对PL3基因编辑型水稻编辑位点焦磷酸测序引物设计、引物有效性检测、基因分型定型检测、基因分型定量检测、盲样检测等试验,建立了PL3基因编辑水稻编辑位点焦磷酸测序检测方法。（2）通过PL3基因编辑型水稻编辑位点HRM引物设计、引物有效性分析,反应体系、反应条件优化及分型定量等试验,确定了HRM反应引物浓度和退火温度的最佳组合为0.4μmol/L和58°C,检出限不低于10%,建立了PL3基因编辑水稻编辑位点HRM检测方法。（3）通过PL3基因编辑型水稻编辑位点双重数字PCR引物和探针设计、反应体系的建立、定量范围检测、LOQ验证等试验,确定了数字PCR反应引物浓度和探针浓度分别为0.4μmol/L和0.15μmol/L,最佳退火温度为62.4℃,最低检... 

【文章来源】：天津农学院天津市

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

水稻DNA的内源基因PCR扩增结果

水稻DNA模板的测序引物PCR扩增结果

编辑型水稻和野生型水稻DNA序列比对图

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：3428684