马槟榔甜蛋白基因（MabinlinⅡ）的密码子优化及其在大肠杆菌中的表达
发布时间：2021-10-11 10:56
植物甜蛋白是从植物种分离提取到的植物蛋白,由于甜蛋白甜度高、热量低、比合成甜味剂安全,不会导致肥胖、安全无毒等优点[1],使得甜蛋白作为新型甜味剂,广受青睐。本研究主要目的是探索MabinlinⅡ甜蛋白在原核生物中的表达以及检测表达的蛋白的甜味。野生马槟榔植株主要分布在云南和广西等热带和亚热带地区,由于地理气候等自然原因,马槟榔植株数量稀少,濒危灭绝。本研究预期借助大肠杆菌表达载体,表达优化过的MabinlinⅡ甜蛋白基因,探究甜蛋白是否能大量表达。为MabinlinⅡ甜蛋白的开发提供一些理论基础。目前MabinlinⅡ甜蛋白基因已经能够在大肠杆菌中表达,为了进一步提高表达量以及测定其甜味活性,在NCBI查询得到MabinlinⅡ甜蛋白基因全长序列,依据大肠杆菌对密码子的利用率不同,将稀有密码子置换为常用密码子,对468 bp长度的转座酶密码子进行了优化。本研究目的则是使用pET28a（+）作为克隆表达载体,E.coli BL21（DE3）作为表达菌,表达出密码子优化后的468 bp长度MabinlinⅡPlus甜蛋白基因和去掉序列中编码氨基酸的信号肽、N-端肽,...
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
MabinlinII和密码子优化后MabinlinIIPlus的序列比对Fig.1-1SequencealignmentofMabinlinIIandMabinlinIIPlusaftercodonoptimization
区间(0.8-1.0)，GC 含量为 58.55%，达到了 GC 值理想区间(30%-70%)，提高了子利用率[46]。终止密码子 TAG 被替换为 TAA。MabinlinII Plus 与 Mabinlin列比较图 1-1，合成的 MabinlinII Plus 的长度和结构如图 1-2 所示。图 1-1 MabinlinII 和密码子优化后 MabinlinII Plus 的序列比对Fig.1-1 Sequence alignment of MabinlinII and MabinlinII Plus after codon optimization
图 1-3 MabinlinII(AB)和密码子优化后 MabinlinII(AB) Plus 的序列比对Fig. 1-3 Sequence alignment of MabinlinII (AB) and MabinlinII (AB) Plus after codon optimization图 1-4 MabinlinⅡ(AB) Plus 氨基酸序列结构示意图Fig. 1-4 Schematic diagram of the amino acid sequence of MabinlinII (AB) Plus2.3.2 目的片段 MabinlinII Plus 的获得根据质粒 pUC57-simple-MabinlinII Plus 中包括的 XhoI 和 BamHI 酶切位点，这两种内切酶对质粒pUC57-simple-MabinlinIIPlus。电泳检测结果如图1-5所示。中片段 MabinlinII Plus 的正确大小为 474 bp，使用回收电泳对片段进行回收。
【参考文献】：
期刊论文
[1]甜味蛋白特性及其表达的研究进展[J]. 何明娟,邹曙明,蒋霞云,刘宁. 生物化工. 2018(05)
[2]甜味蛋白Monellin及其基因工程[J]. 赵萌,蔡成固,刘波. 中国调味品. 2018(07)
[3]甜味蛋白Brazzein及其基因工程[J]. 郑伟伟,赵萌,刘波. 中国调味品. 2018(03)
[4]电子舌工作原理及应用综述[J]. 王栋轩,卫雪娇,刘红蕾. 化工设计通讯. 2018(02)
[5]人造甜味剂对健康的影响[J]. 涂全. 心血管病防治知识(科普版). 2018(02)
[6]金鱼Tgf2转座酶的原核表达及其DNA结合活性[J]. 司蕊蕊,赵茜,卢梦琪,邹曙明,蒋霞云. 上海海洋大学学报. 2017(03)
[7]电子舌技术在真假伊力老陈酒鉴别中的应用[J]. 巴特尔达赖,王锡昌,吴娜,李莉,刘新宇. 食品工业科技. 2017(09)
[8]湖北孝感和四川成都地区来源的酒曲对米酒滋味品质影响的评价[J]. 王玉荣,张俊英,胡欣洁,蔡宏宇,杨成聪,郭壮. 食品科学. 2015(16)
[9]蔗糖水溶液标准物质的研制[J]. 刘新,王爱萍,龚维,姚旭霞,张坤,刘霞. 山东化工. 2015(13)
[10]甜味蛋白Brazzein在乳酸乳球菌的表面表达及鉴定[J]. 王长远,刘祎婷,张丽萍,姚笛. 中国食品学报. 2015(05)
硕士论文
[1]Marker-free转基因番茄表达外源植物甜蛋白ThaumatinⅡ[D]. 杨飞.浙江师范大学 2010
[2]奇异果甜蛋白thaumatin基因二价载体在玉米中的共表达及其在酵母中的表达[D]. 潘宁.首都师范大学 2005
本文编号：3430370
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
MabinlinII和密码子优化后MabinlinIIPlus的序列比对Fig.1-1SequencealignmentofMabinlinIIandMabinlinIIPlusaftercodonoptimization
区间(0.8-1.0)，GC 含量为 58.55%，达到了 GC 值理想区间(30%-70%)，提高了子利用率[46]。终止密码子 TAG 被替换为 TAA。MabinlinII Plus 与 Mabinlin列比较图 1-1，合成的 MabinlinII Plus 的长度和结构如图 1-2 所示。图 1-1 MabinlinII 和密码子优化后 MabinlinII Plus 的序列比对Fig.1-1 Sequence alignment of MabinlinII and MabinlinII Plus after codon optimization
图 1-3 MabinlinII(AB)和密码子优化后 MabinlinII(AB) Plus 的序列比对Fig. 1-3 Sequence alignment of MabinlinII (AB) and MabinlinII (AB) Plus after codon optimization图 1-4 MabinlinⅡ(AB) Plus 氨基酸序列结构示意图Fig. 1-4 Schematic diagram of the amino acid sequence of MabinlinII (AB) Plus2.3.2 目的片段 MabinlinII Plus 的获得根据质粒 pUC57-simple-MabinlinII Plus 中包括的 XhoI 和 BamHI 酶切位点，这两种内切酶对质粒pUC57-simple-MabinlinIIPlus。电泳检测结果如图1-5所示。中片段 MabinlinII Plus 的正确大小为 474 bp，使用回收电泳对片段进行回收。
【参考文献】：
期刊论文
[1]甜味蛋白特性及其表达的研究进展[J]. 何明娟,邹曙明,蒋霞云,刘宁. 生物化工. 2018(05)
[2]甜味蛋白Monellin及其基因工程[J]. 赵萌,蔡成固,刘波. 中国调味品. 2018(07)
[3]甜味蛋白Brazzein及其基因工程[J]. 郑伟伟,赵萌,刘波. 中国调味品. 2018(03)
[4]电子舌工作原理及应用综述[J]. 王栋轩,卫雪娇,刘红蕾. 化工设计通讯. 2018(02)
[5]人造甜味剂对健康的影响[J]. 涂全. 心血管病防治知识(科普版). 2018(02)
[6]金鱼Tgf2转座酶的原核表达及其DNA结合活性[J]. 司蕊蕊,赵茜,卢梦琪,邹曙明,蒋霞云. 上海海洋大学学报. 2017(03)
[7]电子舌技术在真假伊力老陈酒鉴别中的应用[J]. 巴特尔达赖,王锡昌,吴娜,李莉,刘新宇. 食品工业科技. 2017(09)
[8]湖北孝感和四川成都地区来源的酒曲对米酒滋味品质影响的评价[J]. 王玉荣,张俊英,胡欣洁,蔡宏宇,杨成聪,郭壮. 食品科学. 2015(16)
[9]蔗糖水溶液标准物质的研制[J]. 刘新,王爱萍,龚维,姚旭霞,张坤,刘霞. 山东化工. 2015(13)
[10]甜味蛋白Brazzein在乳酸乳球菌的表面表达及鉴定[J]. 王长远,刘祎婷,张丽萍,姚笛. 中国食品学报. 2015(05)
硕士论文
[1]Marker-free转基因番茄表达外源植物甜蛋白ThaumatinⅡ[D]. 杨飞.浙江师范大学 2010
[2]奇异果甜蛋白thaumatin基因二价载体在玉米中的共表达及其在酵母中的表达[D]. 潘宁.首都师范大学 2005
本文编号：3430370
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3430370.html
最近更新
教材专著
